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[发明专利]低起始量的DNA文库构建方法-CN201910181240.9有效
发明人：陈建国;陈川;杨传春;张瑜巨;庄丽雯 -专利权人：深圳乐土生物科技有限公司
申请日： 2019-03-11 - 公布日： 2021-02-26 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：一种低起始量的DNA文库构建方法，该方法包括：取基因组DNA加入标记有生物素的随机引物进行退火并进行扩增反应；分离纯化全基因组扩增产物；对分离纯化的产物进行末端补平得到线性平末端DNA；在补平的线性平末端DNA中加入连接酶进行连接反应；纯化获得双链环状DNA，然后将双链环状DNA打断成线性DNA片段；使用链霉素磁珠捕获标记有生物素的线性DNA片段；对捕获的线性DNA片段进行末端修复以及加A尾碱基反应；在加A尾碱基反应后的线性DNA片段两端连接接头；对连接接头的产物进行PCR扩增得到DNA文库。本方法利用生物素标记的随机引物对少量基因组DNA进行随机扩增，同时实现基因组DNA的放大、截短和生物素标记，从而实现低起始量投入的大片段DNA文库构建。
起始 dna 文库构建方法

[发明专利]一种体外制备环状DNA的方法-CN202010938129.2在审
发明人：高杨;刘超;高峰;顾颖;沈玥 -专利权人：深圳华大生命科学研究院
申请日： 2020-09-09 - 公布日： 2022-03-25 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种体外制备环状DNA的方法。所述方法先根据目的线性DNA片段，设计Gibson组装连接片段，同时引入限制性内切酶Bsa Ⅰ的识别位点序列，然后将目的线性DNA片段和Gibson组装连接片段混合，进行Gibson组装，再以Gibson组装产物为模板，进行滚环扩增，纯化得到RCA产物，之后对纯化的RCA产物进行Bsa Ⅰ酶切，酶切后进行琼脂糖凝胶电泳，切胶回收与目的线性DNA片段大小一致的酶切条带，最后将酶切产物利用T4 DNA连接酶进行环化并纯化得到目的线性DNA片段的环化产物。本发明方法能够替代传统质粒，除必需元件外，仅额外引入长度为11个碱基的内切酶识别序列，将环状DNA分子量降到最低的同时降低生物安全风险，实现体外环化线性DNA片段。
一种体外制备环状 dna 方法

[发明专利]真核细胞中DNA片段的维持、方法和用途-CN202180035899.9在审
发明人：乌韦·D·斯塔尔兹;颜·齐;杰娜·惠勒·卡尔 -专利权人：格雷菲克斯公司
申请日： 2021-03-29 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C12N15/86 文献下载
摘要：将DNA片段引入真核细胞会使所述DNA片段暴露于细胞酶，此类DNA酶具有破坏这些DNA片段并因此降低功能的能力。本发明提供减少转染至细胞中的线性DNA片段的酶促破坏的手段和方法。为此目的，设计了表达构建体，其携带与DNA片段结合的蛋白质基因，并防止所述线性DNA片段的所述酶促破坏。
真核细胞 dna 片段维持方法用途

[发明专利]一种体外快速合成环状DNA的方法-CN202310017485.4在审
发明人：贺权源;左珊如;周军华 -专利权人：湖南师范大学
申请日： 2023-01-06 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提出了一种体外快速合成环状DNA的方法，属于基因工程技术领域。包括：S1.以基因组为模板，针对所需合成环状DNA对应的线性DNA片段分别设计正向引物和反向引物进行PCR，产生线性DNA‑A片段；S2.以DNA‑A片段为模板，分别设计引物产生1/2A片段；S3.将1/2A片段进行梯度退火，产生黏性1/2A片段；S4.用T7连接酶连接黏性1/2A片段；S5.以黏性1/2A片段为模板，再进行PCR，产生DNA‑E片段；S6.将DNA‑A片段和DNA‑E片段经过TaqDNA
一种体外快速合成环状 dna 方法

[发明专利]一种DNA组装和克隆的方法-CN201410489832.4有效
发明人：王璐;田敬东;冯淼;王丽娜 -专利权人：中国科学院天津工业生物技术研究所
申请日： 2014-09-23 - 公布日： 2020-04-24 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种简便的DNA组装和克隆方法。本发明所述DNA组装和克隆的方法，为插入片段和线性载体互为引物和模板进行聚合酶链式反应，获得双链环状DNA；其中插入片段两端分别带有与线性载体两端重叠的重叠序列，线性载体两端分别带有与插入片段两端重叠的重叠序列本发明所述DNA组装和克隆的方法反应体系简单、成本低，操作简便、易于平行操作，对复杂基因片段库、组合基因片段库、多基因通路的DNA组装和克隆具有明显的优势，可广泛应用于单一基因、多基因以及基因片段库的DNA
一种 dna 组装克隆方法

[发明专利]一种将目的DNA片段插入载体中的方法-CN200910051959.7无效
发明人：肖爱军;邵标;赫英俊 -专利权人：上海捷瑞生物工程有限公司
申请日： 2009-05-26 - 公布日： 2010-12-01 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明公开了一种将目的DNA片段插入载体中的方法，包括以下步骤：1)设计并合成扩增目的DNA片断的引物，该引物的最外侧有3～20个碱基与线性载体最外侧完全互补，用该引物扩增得到目的DNA片段；2)将目的DNA片段和线性载体混合，加入同时具有3’端至5’端外切酶活性和同源重组酶活性的重组酶进行反应，得到插入了目的DNA片段的重组载体。本发明具有外切与同源重组的双重功效，在较大范围内(即3～20个碱基)选择PCR产物与线性载体的同源碱基数量，使重组末端碱基数目的选择更加灵活；无需DNA连接酶，只要把目标载体线性化，PCR产物无需任何酶促处理
一种目的 dna 片段插入载体中的方法

[发明专利]一种一次制备多个DNA大片段插入双末端测序文库的方法-CN201510430638.3有效
发明人：常玉晓;赵胜;刘可 -专利权人：中国农业科学院深圳农业基因组研究所
申请日： 2015-07-21 - 公布日： 2017-09-05 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：本发明提供了一种一次制备多个DNA大片段插入双末端测序文库的方法，包括以下步骤将待测DNA打断后进行生物素接头标记处理；将生物素标记的DNA片段分选成N个不同大小的DNA片段，其中，10≤N≤12；将所述N个不同大小的DNA片段分别进行环化处理得到环状DNA，然后清除未环化的线性DNA片段，将所述环状DNA打断后连接上带有不同索引序列的Truseq接头；将带有Truseq接头的不同长度的DNA片段混合并与链霉亲和素磁珠反应，富集带有生物素标记的DNA片段；PCR扩增所述带有生物素标记的DNA片段并测序。
一种一次制备 dna 片段插入末端序文方法

[发明专利]无需克隆的线性表达载体构建方法-CN02117763.5无效
发明人：黄大卫;辛文 -专利权人：中国科学院动物研究所
申请日： 2002-05-16 - 公布日： 2003-04-30 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种线性表达载体的构建方法，具体地，本方法利用(DNA+RNA)杂交体为引物，用一种只能以DNA为模板的DNA聚合酶扩增基因片段，产生含RNA突出端的扩增产物，利用相邻RNA突出端的互补性将各片段连接，达到构建线性表达载体的目的。本发明操作简单，适用范围广，不受目的DNA片段序列变化的影响，构建的线性表达载体可直接用于转化宿主细胞表达目的蛋白，可以为基因表达、抗体和疫苗的生产、蛋白功能研究等领域提供技术平台。
无需克隆线性表达载体构建方法

[发明专利]一种适用于无细胞合成限制性内切酶BsaI的线性DNA模板、体系及其用途-CN202210262366.0在审
发明人：李健;刘晚秋;季向阳;卢屹聪 -专利权人：上海科技大学
申请日： 2022-03-16 - 公布日： 2023-03-24 - 主分类号： C12N15/55 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种适用于无细胞合成限制性内切酶BsaI的线性DNA模板、体系及其用途。一种适于无细胞合成限制性内切酶BsaI的线性DNA模板，所述线性DNA模板依次包括含有启动子的片段、限制性内切酶BsaI的编码基因和含有终止子的片段，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述线性DNA模板不含有限制性内切酶BsaI的酶切位点。本发明的线性DNA模板，能有效防止线性DNA模板被核酸酶降解，其能够适用于任意的体外无细胞蛋白体系且能顺利表达，采用本发明的线性DNA模板进行体外无细胞蛋白合成，获得的限制性内切酶BsaI的纯度高、比活高
一种适用于细胞合成限制性内切酶 bsai 线性 dna 模板体系及其用途

[发明专利]一种新型且高效经济的eccDNA合成方法及其在microRNA过表达中的应用-CN202310715863.6在审
发明人：向熙;余家颖;毛凤彪 -专利权人：中山大学附属第七医院（深圳）
申请日： 2023-06-16 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种新型且高效经济的eccDNA合成方法及其在microRNA过表达中的应用，属于基于生物DNA序列的基因合成领域。本发明通过提取样本总DNA，纯化得到内源性eccDNA；内源性eccDNA与随机引物混合，进行变性退火，退火产物进行RCA反应；以RCA反应产物为模板，扩增获得两条半互补的目标线性片段A和线性片段B；将线性片段A和线性片段B混合，在含有TaqDNA连接酶的反应体系中，进行变性退火和连接反应，获得目标eccDNA。本发明所述方法节省了DNA合成费用，缩短了时间周期，可高保真地获得内源性eccDNA，更好地模拟内源性eccDNA的功能。
一种新型高效经济 eccdna 合成方法及其 microrna 表达中的应用

[发明专利]一种非连接依赖性的快速克隆方法-CN201110418450.9在审
发明人：张力军;徐晓昱 -专利权人：张力军;徐晓昱
申请日： 2011-12-15 - 公布日： 2013-06-19 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种对供体DNA片段进行快速克隆的方法。该方法首先通过在扩增引物5’端引入附加序列使得供体DNA两末端与受体DNA两末端分别有至少12bp的同源序列；接着将受体DNA线性化，最后供体DNA与线性化的受体DNA在核酸外切酶和单链结合蛋白的催化下在体外高效形成重组中间体，该中间体直接转化感受态细胞即可完成供体DNA至受体DNA的克隆过程。本发明所述方法不需要对供体DNA进行酶切处理，即可实现单个供体DNA片段的快速定向克隆，也可实现多个供体DNA片段的一步拼接克隆，还可以用作DNA定点突变。
一种连接依赖性快速克隆方法

[发明专利]用于组装DNA片段和载体的DNA重组试剂盒以及DNA重组方法-CN202310576589.9在审
发明人：李艳艳 -专利权人：核小体（北京）生物技术有限公司
申请日： 2023-05-22 - 公布日： 2023-09-12 - 主分类号： C12N15/64 文献下载
摘要：本发明提供了用于组装DNA片段和载体的DNA重组试剂盒以及DNA重组方法，涉及生物技术，所述试剂盒由UDG酶、BSA、KCl、Tris‑HCl以及余量的水组成；所述UDG酶的酶活力大小为0.3U‑0.75U；所述DNA片段的两个末端具有与所述载体同源的同源臂，所述同源臂序列的长度为15‑30bp，所述载体为线性化载体。本发明还提供了一种DNA重组方法。本发明突破了传统限制性内切酶和DNA外切酶的限制，在特定酶活力大小的UDG酶、BSA、KCl和Tris‑HCl的参与下，针对所述DNA片段和载体，能够快速、高转化效率地完成单片段以及多片段所述DNA和载体的组装，降低了所述DNA片段和载体的组装成本，提高了克隆效率。
用于组装 dna 片段载体重组试剂盒以及方法

[发明专利]单引物扩增建库技术在检测片段化DNA分子断点信息中的应用及试剂盒-CN202110085311.2在审
发明人：杨国华 -专利权人：上海羿鸣生物科技有限公司
申请日： 2021-01-22 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明公开了单引物扩增建库技术在检测片段化DNA分子断点信息中的应用，通过特异性引物线性扩增目标DNA，获得线性扩增产物；对线性扩增产物进行接头连接，获得接头连接产物；其中，接头连接体系中包括单链连接酶和单链接头；对接头连接产物进行文库扩增、测序和生信分析，获得DNA分子断点信息。本发明还公开了用于片段化DNA分子断点信息检测的试剂盒/试剂。本发明通过单引物扩增建库技术极好的实现了靶向检测DNA分子断点的功能。
引物扩增技术检测片段 dna 分子断点信息中的应用试剂盒

[发明专利]一种柞蚕核型多角体病毒穿梭载体的构建方法及应用-CN201910919503.1有效
发明人：范琦;叶博;赵振军;李佩佩;岳冬梅;王林美;张波 -专利权人：辽宁省海洋水产科学研究院
申请日： 2019-09-26 - 公布日： 2021-09-03 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明利用细菌人工染色体克隆载体构建一个包括含有lacZα报告基因和细菌转座子Tn7转座靶点序列的DNA片段、AnpeNPV多角体蛋白基因启动子序列和上游基因部分序列DNA片段、及多角体蛋白基因3’末端部分编码区序列和下游基因部分序列DNA片段的转移载体，将线性化转移载体质粒DNA与线性化的AnpeNPV基因组DNA共转染Tn‑High Five细胞，得到重组AnpeNPV。将该重组AnpeNPV基因组DNA转化至大肠杆菌中，获得AnpeNPV穿梭载体AnpeNPV‑bacmid。它既可以在大肠杆菌中以质粒DNA方式复制，亦可在Tn‑High Five昆虫细胞以及柞蚕蛹体内以病毒DNA方式复制，具有感染性。
一种柞蚕核型多角体病毒穿梭载体构建方法应用

[发明专利]克隆原核生物耐盐相关基因方法-CN200410084812.5无效
发明人：刘广发;谢金镇;陈启伟 -专利权人：厦门大学
申请日： 2004-10-01 - 公布日： 2005-07-27 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：将极端耐盐假单胞菌或其它耐盐原核生物，提取极端耐盐假单胞菌或其它耐盐原核生物的总DNA；对总DNA不完全酶切，酶切后的总DNA经凝胶电泳，找酶切片段区域，切出凝胶，回收DNA片段；完全酶切成线性，将回收的DNA片段与线性载体共育，加入连接酶形成重组质粒，转化用CaCl₂处理获得的感受态受体菌；将转化子溶液涂抹在高盐和LB琼脂培养基上，挑选转化子；提取重组质粒，插入片段，测序，同源性比较
克隆生物相关基因方法

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