本发明公开了一种耐超高温耐碱β-甘露聚糖酶基因,其碱基序列为SEQ ID NO.1。本发明还公开了一种耐超高温耐碱β-甘露聚糖酶的核苷酸序列为SEQ ID NO.2。本发明还公开了一种上述耐超高温耐碱β-甘露聚糖酶基因在制备耐超高温耐碱β-甘露聚糖酶中的应用。本发明之β-甘露聚糖酶具有耐超高温、耐碱特性,适于在生物质降解、食品、饲料、造纸、纺织等化工行业中应用。
本发明提出了一种源自绿色木霉(Trichoderma viride)WL 0422的新型β-甘露聚糖酶基因序列的克隆方法,其核苷酸序列为SEQ ID NO:1。生物信息学分析表明该β-甘露聚糖酶属于糖苷水解酶第5家族,命名为Tvi Man5A,其氨基酸序列为SEQ ID NO:2,相应的基因命名为Tvi man5A。本发明还公开了β-甘露聚糖酶工程菌的构建以及重组β-甘露聚糖酶的高效表达和纯化的方法,制备的重组β-甘露聚糖酶的最适作用温度和pH分别为70℃和3.5,在pH3.0-7.0、60℃以下稳定,具有较大的工业化生产潜力和经济价值
本发明涉及基因工程领域,具体地,本发明提供一种来源于Aspergillus niger保藏编号是:CGMCC No.4235的β-甘露聚糖酶,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,且本发明提供了编码上述β-甘露聚糖酶的基因,其序列如SEQ ID NO.2所示。该甘露聚糖酶的最适温度为75℃,最适pH值为3.0,是一种酸性的β-甘露聚糖酶,因此,在动物肠胃的酸性环境中能够更有效的降低甘露聚糖的抗营养作用,促进动物对饲料的利用率。本发明还提供了该甘露聚糖酶基因高效表达的方法,其表达量可达到11785U/mL,同现有技术相比其表达量更高,因此,可大大降低工业生产成本,使其在饲料、食品、石油化工、酿酒等工业中显示出更大的应用潜力。
本发明公开了一种(a)或(b)所示的碱性β‑甘露聚糖酶:(a)由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列组成的碱性β‑甘露聚糖酶;(b)SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:本发明还公开了能够编码所述碱性β‑甘露聚糖酶的基因、含有所述基因的重组载体、含有所述重组载体的重组菌株以及它们的应用。此外,本发明还公开了制备碱性β‑甘露聚糖酶的方法和用于降解甘露聚糖的组合物。本发明的碱性β‑甘露聚糖酶耐热、活性高且稳定性强。
本发明公开了一种β-甘露聚糖酶及其表达方法与专用工程菌。该酶是具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质:1)序列表中的SEQ ID №:1;2)将序列表中SEQ ID№:1的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加且对甘露聚糖具有降解作用的蛋白质。专用工程菌是将含有该β-甘露聚糖酶成熟蛋白编码序列的毕赤酵母表达载体导入毕赤酵母中得到的。该工程菌实现了β-甘露聚糖酶的高效表达,且发酵工艺简单,提取成本低廉,适于大规模工业化生产。本发明的β-甘露聚糖酶及其工程菌将在β-甘露聚糖酶的工业化生产及动物饲料添加剂的制备中发挥重要作用,应用前景广阔。