本发明公开了一种能提高烟草抗旱的转录因子NtMYB44a及其定点突变方法与应用。所述的能提高烟草抗旱的转录因子NtMYB44a的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；采用CRISPR/Cas9技术，设计了2个sgRNA靶位点，分别位于距离终止密码子（TGA）236bp和230bp，通过转化烟草造成该基因在目标位点的突变生理实验表明突变烟草叶片失水速率显著慢于野生型的对照植株。干旱胁迫后的覆水实验表明突变植株存活率显著高于野生型植株。本发明表明利用CRISPR/Cas9技术针对NtMYB44a基因尾部（即距离NtMYB44a翻译终止密码子（TGA）200bp至300bp序列范围）所创制出的NtMYB44a基因纯合突变烟草材料比野生型烟草具有更高的抗旱能力本发明为NtMYB44a基因及其编码蛋白应用于烟草抗旱育种提供基因资源与技术支持。
本发明公开了烟草查尔酮合成酶NtCHS1基因，编码区核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明通过实验证明，改变烟草中查尔酮合成酶基因的表达水平，可以调节烟草花色、株高以及绿原酸和芸香苷等类黄酮化合物的含量，因此，本发明构建了含有NtCHS1基因的重组表达载体、NtCHS1基因沉默载体，并转化烟草植株本发明通过过表达或沉默技术调节NtCHS1基因的表达，可以获得花色深浅各异或株高较低的转基因烟草植株，提高了烟草的观赏价值；并且可以提高烟草中绿原酸和芸香苷合成，实现了利用烟草大量生产芸香苷和绿原酸的目的，使得烟草叶片获得了更广泛的应用，具有重大的经济价值和应用前景。
本发明提供了一种检测烟草顺‑冷杉醇基因Abi的CAPS标记，其PCR扩增产物核苷酸序列为SEQ ID No.1所示。所述CAPS标记可在烟草幼苗期用于检测是否存在烟草顺‑冷杉醇基因Abi。经32份不同烟草样品分别用本方法和超高液相色谱‑紫外(UPLC‑UV)法的对比实验证实，本发明提供的CAPS标记的基因型值与表型值完全吻合，一致率达100％。本发明方法不仅精准，而且简捷，早期就能科学判断成熟烟叶中是否含有顺‑冷杉醇，可加速高香气品种烟草的选育进程。
