本发明涉及一种蛛丝蛋白的设计合成方法和纺丝;将E.australis蜘蛛MaSp1蛋白的高溶解度和pH敏感的N端结构域、A.ventricosus蜘蛛的MiSp蛋白的高溶解度和pH敏感的C端结构域和C.moluccensis来源的核心域模块组装溶解度高、pH敏感的蜘蛛丝蛋白,其氨基酸序列为SEQ ID NO.4所示。采用亲和层析法或尿素溶解法分离纯化获得目标蛋白,并制备高浓度且均匀透明的纺丝原液,利用湿法纺丝法将纺丝原液注入凝固浴中直接成丝,由于蛛丝蛋白的高pH敏感性使其可在pH2‑pH11较广的范围内成丝。