本发明公开了一种调控猪Ptrf基因表达的增强子序列的鉴定及其应用，猪Ptrf基因增强子，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。利用双荧光素酶报告系统在293FT细胞中证实了该增强子活性，能显著增强Ptrf启动子的转录活性。后续，公开了在猪间充质干细胞中稳定转染dCas9‑KRAB‑sgRNA，构建Ptrf基因增强子表达抑制细胞株的方法，本发明基于CRIS PR/dCas9‑KRAB系统实现对Ptrf基因增强子的表达抑制，这一Ptrf基因增强子序列可为后续制备调控脂肪含量的基因编辑猪提供技术支持。
本发明属于分子生物学领域，具体涉及CRISPR/Cas9靶向敲除人ezrin基因增强子的方法、用于靶向人ezrin基因增强子的特异性gRNA以及一种敲除人ezrin基因增强子的食管癌细胞株。本发明提供了用于敲除人ezrin基因增强子的特异性gRNA，所述gRNA的靶DNA序列为SEQ ID NO.1‑4所示序列中的任意一条序列。本发明提供了一种敲除人食管癌细胞ezrin基因增强子的方法，为利用CRISPR/Cas系统在人食管癌细胞中对ezrin基因进行改造。本发明还提供了一种敲除人ezrin基因增强子的食管癌细胞株，为研究ezrin基因表达与肿瘤侵袭移动的相关性提供了有效的平台。
本发明公开了一种马铃薯组织特异性增强子及其应用；所述的增强子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的所提供的增强子，在作物精准分子设计育种中具有广阔应用前景。该组织特异性增强子可以通过与微小启动子或组成型启动子共同作用，在马铃薯的特定组织中增强目标基因的表达，同时在其他部位不会增强这个基因，不消耗植物多余的能量。采用增强子调控基因表达的模式能够避免组成型顺式调控元件非特异性启动基因表达，产生大量蛋白质或代谢产物对植物生长状况的影响。
本发明公开了一种水稻增强子及基于CRISPR/Cas9技术评估水稻增强子活性的方法，水稻增强子，序列如SEQ ID NO.1。获取增强子，长度为461 bp；LOC_Os07g34589基因的启动子中，分离得到62 bp mini启动子序列；构建负对照载体，使用LOC_Os07g34589基因的两个mini启动子序列反向连接，分别驱动Cas9蛋白和sgRNA表达；构建增强子检测载体，在上述负对照载体中，两个mini启动子中间插入igENH1增强子序列；水稻原生质体的制备与转化；转化后通过分析增强子活性。所述水稻增强子具有较好的增强转录效果。
本发明公开了一种Ptrf基因增强子及其在脂肪沉积调控中的应用，鼠Ptrf基因增强子，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。利用双荧光素酶报告系统证实该增强子，能在293细胞以及3T3‑L1细胞中显著增强鼠Ptrf基因启动子的转录活性。更重要的是，在鼠腹股沟脂肪组织中直接注射慢病毒浓缩液，增强子抑制对于小鼠的脂肪沉积性状产生了显著的改变。本发明基于CRISPR/dCas9‑KRAB系统实现对鼠Ptrf基因增强子的表达抑制，并首次通过慢病毒载体直接获得增强子表达抑制的动物模型，具有操作便利、干扰效率高的优势。
