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[发明专利]一种植物基因编辑载体及其应用-CN202211124303.5在审
发明人：言普;庹德财;沈文涛;周鹏 -专利权人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所
申请日： 2022-09-15 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明公开了一种植物基因编辑载体及其应用。要点是该植物基因编辑载体在克隆位点处含有NC通用接头1‑SfiI‑ccdB基因‑SfiI‑NC通用接头2的NC克隆框结构，含有1个或多个基因编辑靶序列的基因片段能够通过Nimble cloning(NC克隆)一步连接反应，快速克隆到该载体，进行植物基因编辑研究。本发明提供的载体能简单、快速、高效地克隆植物基因编辑靶序列，方便植物基因编辑研究。
一种植物基因编辑载体及其应用

[发明专利]高效温控正筛选克隆载体的设计及构建方法-CN200710092981.7无效
发明人：马跃 -专利权人：马跃
申请日： 2007-11-15 - 公布日： 2008-05-21 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明提供设计和构建用于克隆DNA片段的新型分子克隆载体的方法。本发明利用噬菌体ΦX174的溶菌基因E的表达产物能够导致宿主大肠杆菌细胞死亡的机制设计和构建所述克隆载体。当目的片段插入所述载体上的克隆位点时将导致E基因表达沉默，因此含重组载体的阳性转化子在诱导温度(42℃)下培养时正常生长成菌落克隆，而绝大部分(99.9％)阴性转化子在该温度下培养时将因E基因表达而死亡，不能长成菌落克隆。本发明可用于设计、构建普通克隆载体和T载体。本发明所述克隆载体具有抑制阴性克隆生成的技术特征，因此除用于单基因克隆外，特别适用于构建基因组文库和cDNA文库。
高效温控筛选克隆载体设计构建方法

[发明专利]绵羊Noggin基因的克隆和慢病毒表达载体的构建-CN201010580022.1有效
发明人：刘明军;贺三刚;李文蓉;张雪梅;张宁 -专利权人：新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国-澳大利亚绵羊育种研究中心
申请日： 2010-12-09 - 公布日： 2011-09-14 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明的绵羊Noggin基因的克隆和慢病毒表达载体的构建，确定绵羊Noggin基因编码区的全序列；设计克隆Noggin基因全长cDNA的PCR引物，上游引物N1：ATAGGATCCGGAGGCATGGAGCGCTGCCCCAG，下游引物N2：CGACTCGAGCTAGCACGAGCACTTGCACTC；其引物酶切位点外侧含有保护碱基ATA和CGA；将目的基因克隆于pET41a原核表达载体中，获得pET41a-Noggin重组载体；设计将目的基因定向克隆与慢病毒表达载体的引物：上游引物P1：ATAGGATCCGGAGGCATGGAGCGCTGCCCCAG，下游引物P2：CGACTCGAGCTAAGCGTAGTCTGGGACGTCGTATGGGTAGCACGAGCACTTGCACTC(包含HA抗体标签)；将目的基因定向克隆于pLEX慢病毒载体中，获得Noggin基因慢病毒载体，生产重组病毒，生产转Noggin基因绵羊；通过PCR方法鉴定其转基因羊。
绵羊 noggin 基因克隆病毒表达载体构建

[发明专利]一种零背景的平末端克隆载体pUB857及其构建方法和应用-CN201610709625.4在审
发明人：汪洋;张开;易军;苏会娟 -专利权人：南京理工大学
申请日： 2016-08-23 - 公布日： 2018-03-06 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种零背景的平末端克隆载体pUB857构建及其在基因克隆和基因文库构建中的应用。本发明通过采用Gibson Assembly技术，将分别PCR扩增获得的cI857‑PR启动子以及ccdB基因片段与经PvuII酶切处理的pUC19质粒连接，获得平末端克隆载体pUB857。平末端克隆载体pUB857可克隆任意PCR产物，并且以ccdB作为反筛选标记时克隆阳性率可以达到100％。此外，该克隆载体也可用于基因组文库的高效构建，同时能有效避免空载体干扰，是后基因组时代高通量基因筛选与功能验证的一种有效工具。
一种背景末端克隆载体 pub857 及其构建方法应用

[发明专利]一种转录终止子及其在基因克隆中的应用-CN201510631425.7在审
发明人：李威;李彬 -专利权人：生工生物工程（上海）股份有限公司
申请日： 2015-09-29 - 公布日： 2016-01-06 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及分子生物学和基因工程领域，公开了一种转录终止子在基因克隆中的应用。本发明提供了一种克隆载体，所述克隆载体含有编码链序列为SEQ ID NO：1的转录终止子。本发明进一步提供了上述克隆载体的应用。通过转录终止子效率的验证实验，证明本发明中所述合成的转录终止子具有有效的转录终止效果，将其序列克隆到载体中，构建插入了该转录终止子的载体，能够有效的终止载体上隐秘的转录起始，使得该载体能够用于毒性基因的克隆本发明的转录终止子序列能够广泛用于大肠杆菌克隆载体且本发明构建的重组载体能够广泛用于基因克隆实验。
一种转录终止及其基因克隆中的应用

[发明专利]一种位点重组反向克隆基因方法及其应用-CN01130855.9无效
发明人：叶志彪;李汉霞 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2001-08-28 - 公布日： 2003-04-02 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学领域，与基因技术有关。利用生物的位点特异重组克隆，设计反向杂合特异引物，与带重组克隆的载体系统进行体外定向重组与交换，实现目的基因的反向克隆，获得特异的反义基因克隆载体。这样的载体系统用于基因功能鉴定分析和转基因生物的应用。相比现有技术，它不需对基因片段(或PCR产物)进行限制性的酶切、分离纯化和连接、插入片段的方向分析等操作，是一种快速、便捷、高效的基因克隆到载体系统的新方法。
一种重组反向克隆基因方法及其应用

[发明专利]rpsL基因和多克隆位点融合的新型克隆载体-CN200910206273.0无效
发明人：尚广东;马超;任杰 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2009-10-16 - 公布日： 2010-04-21 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明涉及一个rpsL基因和多克隆位点序列融合的新型克隆载体pLS975。该载体是首先通过重叠延伸PCR手段将一个多克隆位点序列插入至rpsL基因的启动子和开放阅读框之间，再将此DNA片段克隆至去除了多克隆位点序列的高拷贝质粒pBluescript KS(-)而获得。在pLS975中，多克隆位点序列和rpsL基因是在读码框内融合，此融合基因保留了rpsL基因的负筛选标记的功能。pLS975为高拷贝的氨苄青霉素抗性载体，共有18个酶切位点可用于外源DNA片段的克隆，以氨苄青霉素抗性和和1mg/ml的链霉素进行重组克隆的筛选。以本载体进行基因克隆操作简便，重组效率高(96％～100％)，可成为通用的克隆载体。
rpsl 基因克隆融合新型载体

[发明专利]一种零背景的平末端克隆载体pRI857及其构建方法和应用-CN201610892336.2在审
发明人：汪洋;张开;易军;苏会娟;杨慕晗 -专利权人：南京理工大学
申请日： 2016-10-12 - 公布日： 2018-04-20 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种零背景的平末端克隆载体pRI857构建及其在基因克隆和基因文库构建中的应用，属于生物技术领域。所述的质粒pRI857含有Plac启动子，cI857阻遏基因，噬菌体PR启动子，KanR抗性标记，dbl终止子和ColE1复制子基因元件。平末端克隆载体pRI857通过cI857阻遏基因控制PR启动子下游基因KanR的转录，37℃时克隆载体pRI857可进行复制，30℃时，pRI857对重组质粒进行筛选，通过这一技术进行分子克隆，可以获得100％的阳性克隆。此外，该克隆载体也可用于基因组文库的高效构建，同时能有效避免空载体干扰，是后基因组时代高通量基因筛选与功能验证的一种有效工具。
一种背景末端克隆载体 pri857 及其构建方法应用

[发明专利]一种跨膜输出蛋白基因选择克隆T载体及其应用-CN201310350028.3无效
发明人：余旭平;朱军莉;刘江梅;牛冬;沈琴芳;姚学萍;袁佳杰;谭双 -专利权人：浙江大学
申请日： 2013-08-13 - 公布日： 2013-12-25 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种跨膜输出蛋白基因选择克隆T载体及其应用。T载体，通过如下方法构建：将阿拉伯糖启动子插入pMBL载体中β-内酰胺酶基因的上游，得到重组克隆载体；在所述重组克隆载体的β-内酰胺酶基因与启动子之间引入两个Xcm I酶切位点，得到前T载体；限制性内切酶Xcm I酶切所述的前T载体，回收线性化载体，得到所述的T载体。本发明还公开了所述T载体在体外筛选跨膜输出蛋白基因中的应用。本发明的T载体，相容性好，连接效率高，能够以直接克隆随机PCR产物的方式选择性地克隆和筛选含有信号肽序列的跨膜输出蛋白基因，且进行筛选跨膜输出蛋白基因时，只需构建一个基因文库，操作便捷、成本低。
一种输出蛋白基因选择克隆载体及其应用

[发明专利]一种DNA分子克隆方法及其应用-CN201710222909.5有效
发明人：言普;周鹏;沈文涛;庹德财;黎小瑛 -专利权人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所
申请日： 2017-04-07 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明公开了一种DNA分子克隆方法及其应用，所述方法包括以下步骤：获得入门载体含有ccdB基因，ccdB基因两端分别依次连接XcmI酶切位点、接头序列和SfiI酶切位点；获得表达载体含有ccdB基因，ccdB基因两端分别依次连接SfiI酶切位点和接头序列；通过PCR获得目标DNA，通过TA克隆插入到所述入门载体，获得入门克隆；或在PCR过程中通过引物加入相应的接头序列，获得线性PCR产物；将上述入门克隆或线性PCR产物与表达载体混合，在克隆反应液作用下完成克隆。本发明改进了克隆反应液以及入门载体和表达载体的结构，实现单个或多个线性PCR产物或环状质粒上的DNA在克隆反应液作用下直接克隆到环状目标载体的一个或多个部位，提高了克隆效率，可广泛用于各种类型的DNA分子克隆
一种 dna 分子克隆方法及其应用

[发明专利]一种新的新金色分枝杆菌表达体系的构建方法-CN201811528696.X在审
发明人：王友富;王荣;王炳乾;王洪福;邵振平;雷灵芝;黄橙橙;王瑞;陈克纲;应杨波 -专利权人：浙江神洲药业有限公司
申请日： 2018-12-14 - 公布日： 2019-07-05 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明涉及新金色分支杆菌技术领域，且公开了一种新的新金色分枝杆菌表达体系，由克隆载体转染宿主构成，克隆载体在启动子3’端接有碱基序列，该克隆载体从6’至4’依次构建克隆载体的克隆位点，包括以下可操作性元件：耶普拉茨286骨架质粒、Exogenous source基因表达盒、Screening markers基因表达盒；耶普拉茨286质粒是酵母附加体质粒，SD序列后连接有目的基因，Exogenous source基因表达盒自上方至下方依次含有核糖DNA启动子、IRES核酸序列、Exogenous source基因表达框、rDNA终止子；Screening markers基因表达盒包括启动子、Screening markers基因、终止子，克隆载体插入克隆位点中。
克隆载体基因表达盒金色分枝杆菌表达体系构建金色分支杆菌克隆位点启动子终止子宿主基因表达框骨架质粒核酸序列碱基序列目的基因诱导条件核糖质粒转染酵母体质基因

[发明专利]一种克隆载体及其制备与应用-CN201510968192.X在审
发明人：傅向阳 -专利权人：生工生物工程（上海）股份有限公司
申请日： 2015-12-21 - 公布日： 2016-03-16 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明涉及一种克隆载体及其制备与应用。本发明公开了一种克隆载体pUC57-ccdB，为在pUC57载体的多克隆位点插入有ccdB基因的改造载体，所述ccdB基因含有平末端限制性内切酶酶切识别位点。本发明利用CcdB蛋白对不含F质粒的大肠杆菌的致死作用，通过分子生物学技术在pUC57质粒上插入ccdB(含限制性内切酶Sma I酶切位点)基因，获得载体pUC57-ccdB。通过Sma I酶切产生平末端，再连接需要克隆的基因，可以实现需克隆基因的插入，同时避免含空载体菌落的出现。本发明的载体将在分子生物学与基因工程领域中发挥重要作用。
一种克隆载体及其制备应用

[发明专利]鸭瘟疱疹病毒转移载体及其制备方法-CN200410044105.3无效
发明人：王君伟;韩先杰;马波 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2004-12-08 - 公布日： 2005-07-06 - 主分类号： C12N15/869 文献下载
摘要：本发明提供的是一种鸭瘟疱疹病毒转移载体及其克隆方法。它是利用兼并PCR克隆鸭瘟疱疹病毒UL24、TK和gH基因，在获得以上3个基因序列的基础上，利用PCR克隆鸭瘟疱疹病毒TK基因及其侧翼共2.9kb的DNA序列，将其亚克隆入克隆载体pUC18，构建重组质粒pUC－TK2.9，将1acZ基因表达盒插入载体pUC－TK2.9中的TK基因内，构建成的鸭瘟疱疹病毒重组转移载体pUC－TK2.9－1acZ。本产品可用来构建鸭瘟疱疹病毒基因缺失疫苗。可用来构建重组活载体疫苗。
疱疹病毒转移载体及其制备方法

[发明专利]一种新型T载体及其应用方法-CN201410061452.0在审
发明人：邵蔚蓝;周蓉;王洪成 -专利权人：南京仙奕基因科技有限公司
申请日： 2014-02-24 - 公布日： 2014-06-18 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：将待克隆的DNA片段成功插入载体DNA，是筛选目标克隆，进而测定基因序列、分析基因结构与功能、进行基因重组表达等研究工作的首要步骤。本发明的新型载体pHsh-T具有以下特征：（1）同时具有T载体易于克隆和pHsh载体高效表达的功能；（2）具有双向基因表达元件，使正、反向连接的外源基因都得到有效表达，可用于基因文库的构建和活性筛选；（3）质粒分子小，是基因容量大、转化率高、易于进行原位基因改造的表达型T载体。用本发明的载体进行PCR产物的克隆、基因文库的构建和筛选，以及基因的超量表达，可以简化操作步骤、节约材料和时间；提高试验的准确性和成功率；加快研究进程以期获得更多科技成果。
一种新型载体及其应用方法

[发明专利]一种植物病毒表达载体及其应用-CN202211328434.5在审
发明人：言普;庹德财;沈文涛;周鹏 -专利权人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所
申请日： 2022-10-27 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明提供一种植物病毒载体的结构、序列、构建方法及其在植物基因表达中的应用。其要点是该植物病毒载体含有35S启动子‑烟草脆裂病毒TRV2基因组5＇端560bp序列‑NC克隆框‑烟草脆裂病毒TRV2基因组3＇端395bp序列‑Nos终止子的结构，目标基因通过Nimble cloning(NC克隆)一步连接反应，快速克隆到该载体，并在植物中进行高效基因表达和基因编辑。本发明提供的载体能简单、快速、高效地克隆植物基因，方便植物基因表达、沉默或编辑研究。
一种植物病毒表达载体及其应用

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