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[发明专利]一种利用核苷酸衍生物调节限制性核酸内切酶的酶切活性的方法-CN201310305768.5有效
发明人：关一夫;赵国杰 -专利权人：关一夫;赵国杰
申请日： 2013-07-19 - 公布日： 2013-12-11 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用核苷酸衍生物修饰DNA双链底物来调节限制性核酸内切酶对底物的酶切活性的方法。该方法包括利用一种或几种核苷酸衍生物修饰限制性核酸内切酶的底物，即脱氧核酸双链，的识别序列中一个或几个核苷酸以及邻近识别序列3'-末端和5'-末端的核苷酸，从而在不改变限制性核酸内切酶识别序列的前提下调节限制性核酸内切酶对该底物的酶切活性使用核苷酸衍生物对限制性核苷酸内切酶识别序列或其附近的核苷酸进行选择性的修饰，从而达到调节限制性核酸内切酶的特异性酶切效率的方法。该方法可以应用在限制性核酸内切酶参与的各种生物检测和生物化学反应中。
一种利用核苷酸衍生物调节限制性核酸内切酶活性方法

[发明专利]一种混合酶、酶切修饰试剂盒及构建载体的方法-CN201210151642.2无效
发明人：盛司潼 -专利权人：盛司潼
申请日： 2012-05-16 - 公布日： 2012-09-19 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程领域，更具体地说，涉及一种混合酶、酶切修饰试剂盒及构建载体的方法。本发明提供了一种混合酶，包括末端转移酶和平末端限制性内切酶。本发明还提供了含有该混合酶的酶切修饰试剂盒，以及基于该混合酶构建载体的方法。利用本发明的混合酶、酶切修饰试剂盒能同时实现对底物的酶切和酶切产物3’羟基端的延伸，简化实验步骤，提高实验效率，并进一步降低对底物的需求量，本发明构建载体的方法能够实现对底物的酶切和酶切产物3’羟基端的延伸，简化实验步骤，提高实验效率，并能进一步降低对底物的需求量。
一种混合修饰试剂盒构建载体方法

[发明专利]检测DNA点突变的探针、试剂盒及应用-CN202110721028.4有效
发明人：吴曈勃;张珍;胡鱼强 -专利权人：华中科技大学
申请日： 2021-06-28 - 公布日： 2023-08-22 - 主分类号： C12Q1/6827 文献下载
摘要：该探针具有用于被核酸内切酶IV(Endo IV)酶切的AP位点，AP位点将所述探针分为第一序列和第二序列；探针可通过其部分序列分别与突变链和野生链互补形成第一底物和第二底物，第一底物和第二底物分别具有被核酸内切酶IV酶切形成具有第二序列的游离单链的第一活性和第二活性，第一活性大于第二活性。由于Endo IV对不同第一底物和第二底物这种截短的dsDNA结构具有独特的酶切活性，进而设计独特的Endo IV探针，使得其与目标链形成此种特殊的dsDNA结构，极大地降低了Endo IV的序列序列依赖性
检测 dna 突变探针试剂盒应用

[发明专利]测定酶活性的方法-CN201910955993.0在审
发明人：马龙华;李宁;顾好粮;李晓雯;高利艳;沈鹏飞;王晓东;孙斌;王利;刘松坡;谢文君;邹飞青;龙皎;张杰 -专利权人：北京东西分析仪器有限公司
申请日： 2019-10-10 - 公布日： 2020-02-07 - 主分类号： C12Q1/37 文献下载
摘要：本发明适用于酶检测技术领域，提供了一种测定酶活性的方法，包括以下步骤：S1：对金属蛋白酶的酶切底物进行重组蛋白纯化；S2：对酶彻底物进行酶切反应；S3：读取酶切反应后的金属靶板，并对样本内的酶切活性进行计算
酶切反应读取重组蛋白纯化测定酶活性金属蛋白酶金属靶板酶切底物酶切活性灵敏度酶检测样本应用

[发明专利]重组人胰岛素前体的酶切转换方法-CN202011607271.5在审
发明人：聂洪霞;刘海峰;黄菁;许波;吕晓林;张金迪;解福生;郝向慧 -专利权人：华润昂德生物药业有限公司;上海昂德生物科技有限公司
申请日： 2020-12-29 - 公布日： 2021-04-09 - 主分类号： C07K14/62 文献下载
摘要：本发明公开了重组人胰岛素前体的酶切转换方法，包括：(1)将初步纯化的重组人胰岛素前体溶液加入缓冲液进行浓度和pH值的调整得到酶切反应底物混合液；(2)向酶切反应底物混合液中加入重组赖氨酰肽内切酶进行重组人胰岛素前体的酶切转换反应本发明选择重组赖氨酰肽链内切酶作为工具酶，与常用的重组胰蛋白酶相比，单位前体蛋白所需的酶更少，酶切位点单一，酶切过程更高效，使人胰岛素前体的酶切转换效率达到95％以上；在放大酶切时，没有过酶切的顾虑且酶切后获得的目的蛋白纯度更高；重组赖氨酰肽链内切酶酶切最适pH范围离酶切前后蛋白的pI更远，有利于目的蛋白的稳定且对酶切环境中的盐浓度耐受范围更大。
重组胰岛素转换方法

[发明专利]一种转录激活子样效应因子的固相合成方法-CN201110456702.7在审
发明人：庄峰锋 -专利权人：北京唯尚立德生物科技有限公司
申请日： 2011-12-31 - 公布日： 2012-07-18 - 主分类号： C07K14/00 文献下载
摘要：一种转录激活子样效应因子的固相合成方法，包括以下步骤：将一段核酸适配序列(DNAlinker)固定化到固相界面上，用限制性内切酶剪切产生3′-粘性末端；将产物与经限制性内切酶处理过的具有5′-粘性末端的TALE连接单元接触，在DNA连接酶的作用下连接，洗脱未连接底物；用限制性内切酶处理上一步骤所得产物，在DNA上剪切重新生成一个3′-粘性末端，再与经限制性内切酶处理过的具有5′-粘性末端的TALE连接单元接触，在DNA连接酶的作用下连接，洗脱未连接底物；重复操作上述步骤至少一次；用限制性内切酶将连接好的DNA分子从固相界面上剪切下来，分离纯化，除去未连接底物；将所得DNA分子表达成蛋白分子，即为含目标TALE
一种转录激活效应因子相合成方

[发明专利]基于滚环扩增的限制性核酸内切酶单链切割的分析方法-CN201410117436.9有效
发明人：关一夫;赵国杰 -专利权人：关一夫;赵国杰
申请日： 2014-03-26 - 公布日： 2014-10-08 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于滚环扩增的限制性核酸内切酶单链切割的分析方法。该方法中，限制性核酸内切酶的底物是含有酶切位点的DNA双链，其中一条是待检测环形单链模板，另一条是线性单链寡核苷酸。加入限制性核酸内切酶后，切割底物，环形单链模板不断减少，滚环扩增所产生的荧光信号也随之减少。通过检测荧光信号的变化分析限制性核酸内切酶对环形单链模板的切割效率。该方法为研究限制性核酸内切酶对特定单链的切割提供了快速、简便、定量的测量技术。此外，该技术还可以用来研究限制性核酸内切酶与核酸的相互作用及酶切机制、切刻酶的单链切割作用、核苷酸衍生物修饰对限制性核酸内切酶切割的影响，具有重要的科学价值和广阔的应用前景。
基于扩增限制性核酸内切酶单链切割分析方法

[发明专利]一种对任意核酸实施靶向切割的方法-CN201310729068.9有效
发明人：周国华;徐澍;邹秉杰 -专利权人：周国华
申请日： 2013-12-26 - 公布日： 2015-07-01 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种对任意核酸实施靶向切割的方法，为了建立该方法，构建并表达了一类结构识别核酸内切酶。具体步骤包括选择靶核酸的切割位置，设计与之互补的核酸探针；加入反应体系，使探针与底物杂交，形成可被结构识别核酸内切酶识别的二级结构；加入该类酶进行切割反应。其中，可被识别的核酸结构包括核酸侵入结构等；该类核酸内切酶的识别功能域由一类能够识别上述核酸二级结构酶的肽段组成，可选自E.coliMuts等；切割功能域选自IIS型核酸内切酶的切割功能；该类核酸内切酶的识别功能域和切割功能域之间的连接片段主要由丝氨酸和甘氨酸组成；该方法突破核酸底物序列的限制，因此可以实现对不同序列核酸的有效靶向切割。
一种任意核酸实施靶向切割方法

[发明专利]酶切反应后快速去除限制性核酸内切酶的方法-CN202211647796.0在审
发明人：肖晓文;曹文刚;崔银芳;喻春函 -专利权人：湖北擎科生物科技有限公司
申请日： 2022-12-21 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：本发明涉及酶切反应后快速去除限制性核酸内切酶的方法，该方法包括：制备偶联有限制性内切酶的磁珠；将偶联有限制性内切酶的磁珠与底物DNA反应完成后，通过磁吸可快速去除内切酶。本申请方法不需要后续失活或者柱提取的步骤，回收的限制性内切酶仍具有较好的活性，可反复使用；且通过将酶切反应置于96孔板中并结合自动提取仪，可实现高通量去除内切酶。
反应快速去除限制性核酸内切酶方法

[发明专利]一种内切葡聚糖苷酶突变体、基因、工程菌及其应用-CN202010471544.1有效
发明人：柳志强;周海岩;易晓男;周建宝;薛亚平;郑裕国;陈德水;程新平;李勉;王红艳;陈凯茜 -专利权人：浙江工业大学;浙江华康药业股份有限公司
申请日： 2020-05-29 - 公布日： 2022-04-19 - 主分类号： C12N9/42 文献下载
摘要：本发明公开一种内切葡聚糖苷酶突变体、基因工程菌及其在降解纤维素中的应用。所述内切葡聚糖苷酶突变体是将SEQ ID No.3所示氨基酸序列第202位的赖氨酸突变为精氨酸。本发明内切葡聚糖苷酶突变体的比活力比野生酶显著提高1.4倍左右。以微晶纤维素为底物时，纤维素酶与突变酶的共同反应，反应催化效率较以纤维素酶单独降解底物显著提高了23.5％，可以看出突变酶显著提高了酶活力，可以降低工业应用的经济成本，为其在食品生物乙醇等工业生产领域提供了应用基础
一种内切葡聚糖突变体基因工程及其应用

[发明专利]一种用于任意核酸编辑的组合物及方法-CN202010157724.2有效
发明人：徐澍;周国华;邹秉杰 -专利权人：中国药科大学
申请日： 2020-03-09 - 公布日： 2022-11-15 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：一种对任意核酸实施靶向切割的组合物，包括两个主要组分：组分A：寡核苷酸探针：寡核苷酸探针由两部分组成，一部分与靶标底物互补，另一部分具有核酸二级结构；组分B：核酸内切酶分子：该核酸内切酶分子即可以识别所述的寡核苷酸探针的核酸二级结构从而与探针结合，还可以切割DNA或者RNA底物。本发明中，寡核苷酸探针上的二级发卡结构(茎‑环结构)可以直接被核酸内切酶分子识别，形成复合物分子。该复合物分子碰撞靶标的底物的概率将大于探针和酶两个独立扩散的分子同时碰撞靶标底物的概率，从而提高基因编辑效率。
一种用于任意核酸编辑组合方法

[发明专利]基于固载的混合蛋白质为筛选库的蛋白酶底物筛选方法-CN201310374698.9有效
发明人：邹汉法;王春丽;叶明亮 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2013-08-23 - 公布日： 2015-03-18 - 主分类号： C12Q1/37 文献下载
摘要：本发明为一种基于固载的混合蛋白质为筛选库的蛋白酶底物筛选方法。具体地说，是将混合蛋白质通过化学作用键合到固相载体上作为筛选库，将该蛋白库与蛋白酶孵育，蛋白库中蛋白酶的底物蛋白被酶切后所产生的肽段进入溶液，非底物蛋白不能被酶切而完整的保留在固相载体上，固液分离后，采用生物质谱进行溶液中底物肽段的定性定量鉴定，从而得到特异性蛋白酶的底物蛋白信息。本发明是利用蛋白酶与其底物的高度特异性作用，以及固液分离的简便性，将底物蛋白从固载的混合蛋白库中筛选出来的方法。
基于混合蛋白质筛选蛋白酶方法

[发明专利]靶标核酸富集方法及其试剂盒和应用-CN202211114674.5在审
发明人：陈燕旌;张岩;边素莹;周志雄 -专利权人：首都体育学院
申请日： 2022-09-14 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：该方法包括(1)将Tthargonaute核酸内切酶和前端内切DNA向导链混合孵育获得前端内切DNA向导链‑内切酶复合物，将Tth argonaute核酸内切酶和后端内切DNA向导链混合孵育获得后端内切DNA向导链‑内切酶复合物；(2)将含有靶标核酸的核酸底物、步骤(1)获得的前端内切DNA向导链‑内切酶复合物和步骤(1)获得的后端内切DNA向导链‑内切酶复合物进行混合酶切，获得结合靶标核酸的前端内切DNA向导链；(3)混合磁珠和步骤(2)获得的所述前端内切DNA向导链获得结合所述前端内切DNA向导链的磁珠，实现靶标核酸的富集。
靶标核酸富集方法及其试剂盒应用

[发明专利]木寡糖的制备方法-CN201910020125.3有效
发明人：辛凤姣;曹浩;温博婷;王凤忠;孙丽超;谢莹莹;谷天一 -专利权人：中国农业科学院农产品加工研究所
申请日： 2019-01-09 - 公布日： 2021-01-22 - 主分类号： C12P19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种木寡糖的制备方法，包括：以天然木聚糖为酶解底物，依次用耐高温木聚糖内切酶和双功能木聚糖水解酶进行酶解，制得木寡糖；其中，所述耐高温木聚糖内切酶至少包括氨基酸片段V‑F‑E‑F‑E‑D‑R‑R‑T‑D‑L‑L‑E‑P‑A‑E，所述双功能木聚糖水解酶至少包括以下氨基酸片段E‑N‑Q‑N‑D‑I‑P、G‑G‑G、F‑S‑A、D‑D‑P‑V‑E‑R、D‑D‑S以及R‑H‑G。本发明无需对底物进行化学预处理，酶解效率高，工艺成本低。
寡糖制备方法

[发明专利]一种用MALDI-TOF-MS测定ADAMTS-13酶活性的底物、方法及试剂盒-CN201910432683.0在审
发明人：刘学博;马龙华;谭爱国;王文静;张佳华;周游;江游;于海波;李宁 -专利权人：刘学博;马龙华;谭爱国;王文静;张佳华;周游;江游;于海波;李宁
申请日： 2019-05-23 - 公布日： 2020-11-24 - 主分类号： G01N27/62 文献下载
摘要：本发明属于医学分子生物学，蛋白多肽检测技术领域，尤其涉及一种能够利用MALDI‑TOF‑MS来检测金属蛋白酶ADAMTS‑13酶活性的底物、方法及试剂盒。包括以下步骤：(1)ADAMTS‑13酶切底物GST‑vWF82‑6XHis重组蛋白的表达纯化；(2)酶切反应；(3)ADAMTS‑13酶切产物被金属螯合芯片富集以后被MALDI‑TOF‑MS识别检测，并由分析软件得到血清样本中ADAMTS‑13的酶切活性。本发明的体外定量测定ADAMTS‑13酶活性的底物、方法及试剂盒，灵敏度、准确性好，操作简便，价格便宜，适用于广泛病人筛查。
一种 maldi tof ms 测定 adamts 13 活性方法试剂盒

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