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[发明专利]测序基因分型技术中测序酶切组合的确定方法-CN201510660486.6有效
发明人：胡晓湘;王宇哲;曹学敏;李宁 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2015-10-13 - 公布日： 2018-11-20 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明提供了一种测序基因分型技术中测序酶切组合的确定方法，包括以下步骤：(1)对目的基因组进行限制性内切酶酶切位点预测，统计不同酶切方式获得的酶切片段数目；(2)根据步骤(1)中所预测的各种酶切方式的酶切片段设计每种酶切片段两端的接头序列及PCR扩增引物序列；(3)分别针对不同酶切方式利用GBS技术构建测序文库；(4)利用步骤(3)构建的测序文库进行测序；(5)根据测序结果获得SNP标记位点；(6)根据不同酶切组合所获得的SNP标记位点个数、酶切片段大小确定针对目的基因组的特定酶切组合。
基因技术中测序酶切组合确定方法

[发明专利]测序文库的构建方法-CN202310416765.2在审
发明人：李凯;廖端芳;齐捧;曾娅玲;林丽美;肖莉;何超平;传军 -专利权人：湖南中医药大学
申请日： 2023-04-18 - 公布日： 2023-07-28 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：本发明提供了一种测序文库的构建方法，该方法包括如下步骤：提供待测DNA的酶切片段；采用连接酶连接所述酶切片段和测序接头，并加入切刻酶，制备接头产物；以及以所述接头产物为模板进行PCR扩增，构建测序文库；其中，所述测序接头的核苷酸序列中包含所述切刻酶的酶切位点，所述切刻酶的酶切位点上游第一个碱基被特异性改变。采用本发明的方法，能够有效地防止测序接头之间发生自连，从而提高测序接头与待测片段的连接效率和测序数据的合格率。
序文构建方法

[发明专利]一种简化基因组测序的方法与相关应用-CN202211356595.5在审
发明人：阮珏;陈鹏;常玉晓;郭建飞 -专利权人：中国农业科学院深圳农业基因组研究所
申请日： 2022-11-01 - 公布日： 2023-03-07 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明提供了一种简化基因组测序的方法与相关应用。本发明的简化基因组测序的方法包括：对重测序文库进行限制性内切酶酶切后，分选不含有酶切位点的目标长度的片段进行测序，从而实现简化基因组测序。本发明在全基因组测序文库的基础上，在测序之前进行限制性内切酶酶切，含有酶切位点的片段因为被切断而不能被测序，从而对基因组上含有酶切位点的片段进行反向选择，实现对基因组的简化。
一种简化基因组方法相关应用

[发明专利]用于构建单细胞转录组测序文库的试剂盒及文库构建方法-CN201510696296.X有效
发明人：柳青;王占东;邵长超;曹善柏;刘涛;杨洁;玄兆伶;李大为;梁峻彬;陈重建 -专利权人：安诺优达基因科技（北京）有限公司;浙江安诺优达生物科技有限公司;安诺优达(义乌)医学检验有限公司
申请日： 2015-10-22 - 公布日： 2019-05-21 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提供一种单细胞转录组测序文库的构建方法。通过将前期构建的测序用DNA片段文库用RsaI限制性内切酶进行酶切，并对酶切产物进行PCR扩增，能够显著提高对单细胞转录组测序文库进行测序时的有效数据比例。
用于构建单细胞转录序文试剂盒文库方法

[发明专利]一种BAC末端测序的方法-CN201510778451.2在审
发明人：李广存;金黎平;杨煜;郭晓;杨晓慧;徐建飞;马伟清;庞万福;卞春松;段绍光;刘杰 -专利权人：中国农业科学院蔬菜花卉研究所;山东省农业科学院蔬菜花卉研究所;百博明创（北京）生物科技有限公司
申请日： 2015-11-13 - 公布日： 2016-02-24 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种BAC末端测序的方法。本发明的方法包括如下步骤：1)将目的片段与克隆载体连接，得到重组载体；2)用限制性内切酶酶切所述重组载体，回收大于所述克隆载体的线性DNA片段，得到含有目的片段2个末端的DNA片段；所述目的片段上至少含有2个所述限制性内切酶的酶切识别位点，且在所述克隆载体上没有所述限制性内切酶的酶切识别位点；3)连接所述含有目的片段2个末端的DNA片段，使其环化形成含有目的片段末端的质粒，测序所述质粒，实现目的片段的末端测序通过实验证明：本发明的方法实现BAC末端测序100％成功，解决BAC末端测序成功率低的问题，不仅使BAC末端测序变得简单易行，而且测序成本低，特别适合于大规模BAC末端测序。
一种 bac 末端方法

[发明专利]小RNA文库测序过程中去除接头自连产物的方法-CN202111127225.X在审
发明人：马士清;刘军;陈一友 -专利权人：杭州诺辉健康科技有限公司
申请日： 2021-09-26 - 公布日： 2023-03-31 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种去除测序文库构建过程中的接头自连产物的方法。具体而言，提供了一种利用核酸内切酶切割接头自连产物的方法，所述方法包括混合核酸内切酶和所述接头自连产物的步骤：其中，接头自连产物中带有核酸内切酶识别位点，该位点两个接头各自带有一部分；核酸内切酶可以识别酶切位点并进行切割；任选地，所述接头自连产物产生于RNA测序文库的构建过程中；任选地，所述接头为RNA测序文库构建过程中使用的5’接头和3’接头。
rna 文库过程去除接头产物方法

[发明专利]一种利用酶切延伸增加读长的测序方法-CN201210047900.2有效
发明人：盛司潼 -专利权人：盛司潼
申请日： 2012-02-28 - 公布日： 2012-07-11 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程领域，提供了一种利用酶切延伸增加读长的测序方法。本发明所述利用酶切延伸增加读长的测序方法，首先将第一anchor结合于原待测核酸片段的接头一上，使用连接测序法读取第一anchor延伸末端后的M个核苷酸的序列信息；然后利用内切酶识别相应的酶切识别位点将已读取序列信息的核苷酸部分或完全切除，在酶切回收的待测序片段上连接新的接头二，然后在接头二上锚定结合第二anchor，并在第二anchor延伸末端连接荧光探针，向前延伸读取核苷酸序列信息；通过重复上述操作，得到原待测核酸片段所需的核苷酸序列信息，从而利用酶切延伸进行测序的方法实现延长测序的读长且使读长不受限制的目的。
一种利用延伸增加方法

[发明专利]一种核酸测序方法-CN201310681260.5无效
发明人：韩坤;白鹏利;缪鹏;程文播;刘涛;钱俊;唐玉国 -专利权人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
申请日： 2013-12-13 - 公布日： 2014-03-26 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种将核酸酶切反应用于核酸测序的方法。该方法包括以下步骤：1)用酶对核酸靶序列酶切、降解，生成酶切产物；2)对酶切产物进行检测，最终得到核酸序列信息。本案提供的利用核酸切酶进行靶序列切割、对未知序列进行测定的方法是利用核酸切酶的生物降解性，通过对降解生成的酶切产物进行测序实现对核酸序列的测定。
一种核酸方法

[发明专利]一种对DNA片段进行测序的方法-CN200910076243.2无效
发明人：张爱民;刘冬成;郭小丽;卓国银;阳文龙;孙家柱 -专利权人：中国科学院遗传与发育生物学研究所
申请日： 2009-01-08 - 公布日： 2009-06-24 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种对DNA片段进行测序的方法。该方法包括如下步骤：1)以待测DNA片段为起始片段；2)对所述起始片段进行一端测序或两端测序，得到所述起始片段的一端序列或两端序列；3)用所述起始片段的一端序列或两端序列上存在的至少一个限制性内切酶位点对应的至少一种限制性内切酶酶切所述起始片段，回收含有所述起始片段中未测序片段的片段；4)对含有所述起始片段中未测序片段的片段进行测序，得到所述含有所述起始片段中未测序片段的片段的序列；5)将所测得的所有序列进行拼接得到所述待测DNA片段的序列。本发明方法保证了所测序列的真实性，克服了传统的嵌套缺失法测序的繁复性，极大的提高了测序的效率和准确性。
一种 dna 片段进行方法

[发明专利]一种检测核酸内切酶酶切位点的方法-CN201710522336.8有效
发明人：李卓坤;徐东洋;杨晋;顾颖;黎宇翔;陈奥;徐崇钧;章文蔚 -专利权人：深圳华大生命科学研究院
申请日： 2017-06-30 - 公布日： 2022-01-04 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测核酸内切酶酶切位点的方法。本发明利用芯片上数以十亿计的核酸序列来高通量系统性的检测核酸内切酶对DNA的识别切割位点及核心序列特征，采用两次测序分别获取碱基序列及正常的双链DNA，同时根据酶切前后荧光信号的改变，运用生物信息分析方法得到内切酶的识别切割位点通过对内切酶识别切割位点的研究，可检测内切酶的识别切割位点的倾向性，并且可以提前预测内切酶的星号活性及基因组编辑技术中内切酶的脱靶效应，同时，也可用于大规模筛选新型基因组编辑系统中使用的内切酶所需要识别的与现有技术中的测序方法相比，本发明的检测方法具有速度快且通量高的优势。
一种检测核酸内切酶酶切位点方法

[发明专利]一种重组拓扑异构酶及其在构建测序文库中的应用-CN202111297549.8有效
发明人：宋新文;刘梦;耿亮;辛文 -专利权人：北京全式金生物技术股份有限公司
申请日： 2021-11-04 - 公布日： 2023-08-11 - 主分类号： C12N9/90 文献下载
摘要：本发明公开一种重组拓扑异构酶及其在构建测序文库中的应用。本发明首先公开了氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的重组拓扑异构酶。本发明进一步公开了上述重组拓扑异构酶在测序文库的构建中的应用。本发明创造性地将拓扑异构酶应用到酶切法DNA建库体系中，使得对DNA样本的片段化、末端修复和3’加A尾处理效率更高，更容易达到平衡；另外，重组拓扑异构酶参与的DNA解链和切割作用解决了测序文库构建过程中的酶切反应中单链快速退火形成双链使末端修复不彻底、DNA高GC区域在测序中GC分布不平衡及在样本起始量较低时文库转化效率低的问题，提高了测序文库的产量和质量，具有广泛的适用性和便捷的操作性。
一种重组拓扑异构酶及其构建序文中的应用

[发明专利]一种构建CNV检测文库的方法及CNV检测方法-CN202210258037.9在审
发明人：郑贝贝;夏琴;赵丁丁;冒燕;孔令印;梁波 -专利权人：苏州贝康医疗器械有限公司
申请日： 2022-03-16 - 公布日： 2022-05-10 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：所述方法包括：采用双核酸内切酶组合对样本基因组DNA进行切割得到酶切产物，将所述酶切产物与测序接头连接，得到连接产物；对所述连接产物进行PCR扩增，得到测序文库，所述双核酸内切酶组合包括MboI、MseI、BfaI或ApoI‑HF中任意2种的组合。本发明的文库构建方法，能够用较少的数据量(测序成本)对全基因组部分代表性区域进行高深度测序，获得高密度和覆盖均一的足量能进行CNV分析的SNP位点。
一种构建 cnv 检测文库方法

[发明专利]一种表达型前T载体及其制备与应用-CN200710069814.0无效
发明人：林陈水;许明;于真真;任慧颖;杨丹燕 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2007-06-29 - 公布日： 2008-12-31 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明的有益效果主要体现在：一步法使目的基因克隆并得到表达，省略复杂的重组过程；在构建过程中无需对PCR产物进行纯化、酶切，前T载体用XcmI单酶切即可得到线性化的T载体，酶切效率高，无需使用其他限制性内切酶参与；目的基因无需使用价格昂贵的IPTG诱导，可以低成本地进行大规模工程菌发酵；可在目的基因得到表达后再进行测序鉴定，将表达结果符合期望的转化子送DNA测序公司测序可以提高测序成功率，节约经费。
一种表达载体及其制备应用

[发明专利]一种增加测序读长的测序方法-CN201210232676.4有效
发明人：盛司潼 -专利权人：盛司潼
申请日： 2012-07-06 - 公布日： 2012-11-07 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及生物基因工程领域，提供了一种增加测序读长的测序方法。本发明所述增加测序读长的测序方法，首先将第一锚定引物结合于待测核酸片段的第一接头上，使用连接测序法读取第一锚定引物延伸末端后的M个核苷酸的序列信息；利用内切酶识别相应的酶切识别位点将已读取序列信息的核苷酸部分或完全切除，在酶切回收的待测序片段上连接新的第二接头，然后在第二接头上锚定结合第二锚定引物，并在第二锚定引物延伸末端连接新的荧光探针，向前延伸读取核苷酸序列信息；通过循环上述操作，得到待测核酸片段所需的核苷酸序列信息，从而利用酶切延伸测序的方法增加了测序读长。
一种增加测序读长方法

[发明专利]一种针对超大基因组物种全基因组基因型鉴定的方法与应用-CN202211354321.2在审
发明人：马志岗;常玉晓;刘金栋 -专利权人：中国农业科学院农业基因组研究所
申请日： 2022-11-01 - 公布日： 2023-09-12 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明针对超大基因组物种全基因组基因型鉴定的方法包括：对全基因组重测序文库进行限制性内切酶酶切；筛选掉酶切后片段长度小于目标片段长度的文库；对筛选后的文库进行二次限制性内切酶酶切；并以二次酶切后的文库为模板进行PCR扩增，富集目标文库；分选出不含酶切位点的目标长度的文库；进行低覆盖度测序；鉴定基因型。本发明在全基因组重测序文库的基础上，利用反向简化基因组测序和低覆盖度测序策略对超大基因组进行二次简化，约0.03～0.06×的数据即可满足超大基因组物种全基因组基因型鉴定的需要，效率高，成本低。
一种针对超大基因组物种基因型鉴定方法应用

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