[发明专利]一种CRISPR/Cas9介导的植物多基因编辑载体的构建方法和应用在审
| 申请号： | 202110773909.0 | 申请日： | 2021-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN113564197A | 公开（公告）日： | 2021-10-29 |
| 发明（设计）人： | 张辉;汪冲;罗鹏宇;洪政;张亚军 | 申请（专利权）人： | 上海师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/29;C12N15/66;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 黎双华 |
| 地址： | 200234 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种构建简便、高效的植物多基因编辑载体方法，其包括pMK‑(1‑12)中间载体及终载体pMMK‑Cas9。载体构建的方法包括以下步骤：将多个sgRNA通过多顺反子tRNA‑gRNA方式连接到pMK(1‑12)中间载体上，每个中间载体上可以连接1‑8个sgRNAs，得到pMK(1‑12)‑PTG载体；将多个pMK(1‑12)‑PTG载体上的U6/U3表达盒连接到pMMK‑Cas9载体上，pMMK‑Cas9可以连接2个到7个pMK(1‑12)‑PTG载体上的U6/U3表达盒，得到pMMK‑PTG载体，根据不同的靶位点和小载体组合，可达到2‑56个靶位点的多基因编辑。整个流程只需要一次PCR反应和两次“金门”连接体系即可完成，流程简单快速。本发明还以该载体敲除水稻LEA基因家族25个成员为例，验证该载体多基因编辑的高效性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 crispr cas9 植物 多基因 编辑 载体 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
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