[发明专利]一种多基因共表达成套载体及其应用在审
| 申请号： | 201911084755.3 | 申请日： | 2019-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN110747216A | 公开（公告）日： | 2020-02-04 |
| 发明（设计）人： | 刘翠敏;刘小强 | 申请（专利权）人： | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/70 |
| 代理公司： | 11245 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 白凤莹 |
| 地址： | 100101 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种多基因共表达的成套载体及其应用。本发明首先公开了一种多基因共表达的成套载体，该成套载体包括质粒1、质粒2和质粒3；所述质粒1、质粒2和质粒3含有不相同的复制子、不相同的抗性基因、诱导外源基因表达的调控基因和一到多个串联的外源基因表达盒。本发明进一步公开了上述成套载体在诱导多基因共表达中的应用。本发明多基因共表达的成套载体中各质粒采用不同抗生素筛选标记，保证共表达；采用不同复制子，排除质粒不相容性，保证共表达；采用不同诱导剂控制表达，可以实现多基因的定时、定量表达；采用pQlink串联方法实现多基因在各质粒上的串联，每个基因由独立的启动子和终止子控制，保证互不干扰。 | ||
| 搜索关键词： | 质粒 多基因 共表达 串联 复制子 外源基因表达盒 诱导外源基因 抗生素筛选 不相容性 调控基因 互不干扰 抗性基因 启动子 诱导剂 终止子 保证 应用 诱导 基因 | ||
【主权项】：
1.一种多基因共表达的成套载体，其特征在于：所述成套载体包括质粒1、质粒2和质粒3；所述质粒1、质粒2和质粒3均含有不相同的复制子、不相同的抗性基因、诱导外源基因表达的调控基因和一到多个串联的外源基因表达盒。/n
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国科学院遗传与发育生物学研究所，未经中国科学院遗传与发育生物学研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201911084755.3/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 一种多基因共表达成套载体及其应用-201911084755.3
- 刘翠敏;刘小强 - 中国科学院遗传与发育生物学研究所
- 2019-11-07 - 2020-02-04 - C12N15/66
- 本发明公开了一种多基因共表达的成套载体及其应用。本发明首先公开了一种多基因共表达的成套载体，该成套载体包括质粒1、质粒2和质粒3；所述质粒1、质粒2和质粒3含有不相同的复制子、不相同的抗性基因、诱导外源基因表达的调控基因和一到多个串联的外源基因表达盒。本发明进一步公开了上述成套载体在诱导多基因共表达中的应用。本发明多基因共表达的成套载体中各质粒采用不同抗生素筛选标记，保证共表达；采用不同复制子，排除质粒不相容性，保证共表达；采用不同诱导剂控制表达，可以实现多基因的定时、定量表达；采用pQlink串联方法实现多基因在各质粒上的串联，每个基因由独立的启动子和终止子控制，保证互不干扰。
- α-红没药醇合成质粒及其构建方法与大肠杆菌工程菌株-201810015692.5
- 王崇龙;金善元 - 苏州大学
- 2018-01-08 - 2020-01-31 - C12N15/66
- 本发明公开了α‑红没药醇合成质粒及其构建方法与大肠杆菌工程菌株，构建IPP和DMAPP合成质粒pS‑MVA以及α‑红没药醇合成质粒，再将两种质粒共同导入到大肠杆菌菌株
- 一种新的基因克隆方法-201610357602.1
- 王超 - 北京克隆欧科科技有限责任公司
- 2016-05-26 - 2020-01-10 - C12N15/66
- 本发明涉及一种基因克隆技术，通过在基因克隆过程中引入固定接头来一次性组装载体基本元件和目的基因，并用这些固定接头作为分子标记设计通用pcr引物进行筛选和测序，同时用特异于这些通用的固定接头的抗体进行目的基因表达检测。该固定接头为在不同克隆实验都能通用的序列固定的DNA接头（同时也是做克隆连接的DNA接头），然后利用这个固定克隆接头所编码的寡肽为通用的检测标记。
- 一种犬红细胞抗原DEA1.1的鉴定方法-201910871619.2
- 李来庆 - 广州艺得诺生物科技有限公司
- 2019-09-16 - 2019-12-31 - C12N15/66
- 本发明公开了一种犬红细胞抗原DEA1.1的鉴定方法，属于基因技术领域，步骤如下：获取犬红细胞表面抗原DEA1.1基因，将基因序列进行密码子优化；构建DEA1.1表达载体，将修饰后的DEA1.1基因进行基因合成；将合成后的DEA1.1基因转化至DH5α细胞扩增；将扩增后的DEA1.1基因转化至BL21细胞大量表达；对DEA1.1蛋白纯化；取重组表达纯化后DEA1.1蛋白与犬血液混合，检测凝血情况，鉴定DEA1.1抗原性。本发明通过基因工程手段重组表达犬红细胞表面抗原DEA1.1，以达到快速简便的检测犬DEA1.1血型、提高犬输血成功的概率、减少犬类医疗成本以及提高犬大量失血后的存活率的目的。
- 一种细菌启动子报告载体的构建方法及其应用-201910955771.9
- 崔格特 - 武汉博欧特生物科技有限公司
- 2019-10-09 - 2019-12-31 - C12N15/66
- 本发明公开了一种细菌启动子报告载体的构建方法及其应用，首先构建含有β‑半乳糖苷酶lacZ基因的载体，将目的基因启动子插入到该载体中的lacZ基因上游，得到用于检测基因启动子活性的报告载体。将此报告载体导入待测菌株中，通过检测和比较菌株β‑半乳糖苷酶活性推测目的基因启动子活性的变化。本发明的报告载体既可以用于检测细菌中基因启动子活性，判断基因表达的强弱，又可以用于检测细菌中未知DNA片段有无启动子活性，判断基因启动子的位置，操作成本低，结果稳定可靠。
- 用于表达大型核酸转基因的质粒载体-201780078633.6
- D·基维利希 - D·基维利希
- 2017-11-02 - 2019-12-31 - C12N15/66
- 在某些实施例中，本文提供了质粒表达载体以及使用这种载体进行真核细胞中的转基因的瞬时或稳定整合表达的方法。本文提供的质粒表达载体的大小小于3.6kb并且可以容纳转基因和同源臂的大型(>5kb)多核苷酸插入以实现稳定整合。
- 检测环境雌激素类干扰物的酵母重组系统及方法-201910751535.5
- 苗晶晶;刘力铷;潘鲁青;刘佩佩 - 中国海洋大学
- 2019-08-15 - 2019-12-13 - C12N15/66
- 一种检测环境雌激素类干扰物的酵母重组系统及方法，该系统采用以下方法构建：将长牡蛎雌激素受体基因CgER连接到载体pGADT7，构建重组表达质粒；将爪蟾卵黄蛋白原基因ERE连接到载体pGBKT7，构建重组诱饵质粒；将重组表达质粒与诱饵质粒共转化入Y187酵母细胞中，筛选培养阳性克隆菌株。营底栖固着生活的长牡蛎生物毒性蓄积能力强，更能揭示海洋污染物对生物的潜在危害，故长牡蛎被视为一种理想的海洋环境监测生物。以Y187菌株作为酵母宿主，含有报告基因Lac Z，简化了报告质粒的构建，大大降低了重组酵母假阳性发生的概率。本发明的酵母重组系统大大提高了鉴定或检测具有内分泌破坏活性化学品的特异性。
- 一种快速构建多价抗体表达载体的方法和试剂-201810524652.3
- 刘楚新;杨乃波;曹丽霞;李秉睿;丁琪 - 深圳华大生命科学研究院
- 2018-05-28 - 2019-12-06 - C12N15/66
- 本申请公开了一种快速构建多价抗体表达载体的方法和试剂。本申请方法包括，用化学合成的两端有酶切位点的抗体基因和连接肽基因组成的插入片段构建载体‑抗体基因‑linker‑1；采用定点突变，构建载体‑抗体基因‑linker‑2和载体‑抗体基因‑3，使三个克隆载体中，前一个克隆载体插入片段3’端酶切的黏末端与后一个载体插入片段5’端酶切的黏末端互补，使三个克隆载体酶切产物能依序相连；采用定点突变将预设的位于多价抗体表达载体两端的酶切位点加入表达载体骨架中，并将多价抗体表达载体接入表达载体骨架。本申请的方法，采用一种核酸内切酶，对所有片段统一进行酶切和连接，即可实现各片段有序连接，获得多价抗体表达载体，大大简化了多价抗体表达载体构建流程。
- 一种利用枯草芽孢杆菌表达系统快速、高效筛选抗菌基因的方法-201710415867.7
- 吴佳;李梦歌;苗苗;董五辈 - 华中农业大学
- 2017-06-05 - 2019-12-06 - C12N15/66
- 本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌表达系统快速、高效的筛选抗菌基因的方法，其步骤是：先诱导表达植物中存在的抗性基因，构建一个完整的cDNA文库，再导入到枯草芽孢杆菌中，利用其分泌表达系统，表达重组质粒，先筛选对枯草芽孢杆菌产生致死作用的转化子，再进一步经过抗线虫筛选及粗蛋白抑菌筛选，从而能够快速高效的得到抗性基因进行后续验证工作。本发明快速、优质、高效，且目的性强，筛选工作相对简单，得到阳性克隆的概率高。
- 工程化B细胞及相关组合物和方法-201780084314.6
- H·I·莱维斯基 - 朱诺治疗学股份有限公司
- 2017-11-30 - 2019-11-22 - C12N15/66
- 本文提供了如用于过继细胞疗法的工程化B细胞。在一些方面中，还提供了用于工程化和产生所述细胞的方法和组合物、含有所述细胞的组合物、以及用于将所述细胞和组合物给予至受试者的方法。在一些实施方案中，将细胞工程化以产生和/或分泌外源蛋白质，如治疗性蛋白质，包括抗体及其抗原结合片段。在一些方面中，所述细胞和方法的特征提供增加的或改进的细胞活性、功效和/或持久性。
- 多核苷酸改组方法-201780086442.4
- D·格里蒙;H·格斯特曼;Y·布赖斯;R·拉威尼 - 根特大学;勒芬天主教大学
- 2017-12-19 - 2019-11-15 - C12N15/66
- 本发明的第一个目的是提供一种制备Tile载体的方法，所述Tile载体是包含选择性标记和编码多核苷酸的载体，其中所述编码多核苷酸的前面和后面紧接着Ms型识别序列,其中所述前面的和后面的识别序列被相同的IIs型限制性内切酶识别，但具有相反的方向。更具体地，所述前面的和后面的IIs型识别序列的位置和方向提供了所述Tile载体被相应的IIs型限制性内切酶裂解，导致在其各个末端处含有具有已知的方向和长度的突出端序列同时缺少所述前面的和后面的Ms型识别序列的所述编码多核苷酸序列的释放。本发明的第二个目的是提供使用如前面所述获得的Tile载体连接两个或更多个编码多核苷酸以形成产物多核苷酸的方法。典型地，所述产物多核苷酸整合在载体中。
- 专利分类
