[发明专利]利用重组大肠杆菌发酵制备包被TP抗原的方法有效
| 申请号： | 201910723759.5 | 申请日： | 2019-08-07 |
| 公开（公告）号： | CN110305927B | 公开（公告）日： | 2023-03-28 |
| 发明（设计）人： | 刘梁涛;李新乐;尚朋林;潘芳芳;张玉莉;李艳姣;张文婧;邓娟;李桂林;赵巧辉;付光宇;吴学炜;杨增利 | 申请（专利权）人： | 郑州伊美诺生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C07K14/20;C12R1/19 |
| 代理公司： | 郑州异开专利事务所(普通合伙) 41114 | 代理人： | 韩华 |
| 地址： | 450016 河南省郑州市*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用重组大肠杆菌发酵制备包被TP抗原的方法，包括以下步骤：第一步，培养种子液；第二步，将种子液依次发酵培养和诱导培养，第三步，诱导培养结束后，收菌，离心分离，洗涤，破菌，过滤，最后层析分离得到纯化的包被TP抗原。本发明在培养过程中对发酵培养基进行合理的补料调控，准确将发酵培养基的溶氧浓度控制在预设范围内，实现了菌株的高密度发酵培养，单批次菌体产能为传统工艺的4倍以上，大大提高了包被TP抗原的得率，其得率可高达11.23mg/g以上，包被TP抗原的纯度提高了18%；经验证本发明可重复性好，单批次产能高，降低了大规模生产包被TP抗原的成本。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 重组 大肠杆菌 发酵 制备 包被 tp 抗原 方法 | ||
【主权项】：
1.一种利用重组大肠杆菌发酵制备包被TP抗原的方法，其特征在于：包括以下步骤：第一步，挑取重组大肠杆菌菌株接种在LB培养基中培养15～16h，得一级种子；将得到的一级种子接种到LB培养基内扩大培养2～3h，得到二级种子液；第二步，将第一步得到的二级种子液接种到发酵培养基中，发酵培养2～3h后，取样检测发酵培养基中重组大肠杆菌菌株的OD600值，当OD600值为5～7时，降温，向发酵培养基内加入诱导剂诱导培养60～72h；其中，在发酵培养阶段，发酵培养基的溶氧浓度≥40%；在诱导培养阶段，发酵培养基的溶氧浓度≥30%；第三步，诱导培养结束后，收菌，离心分离，洗涤，破菌，过滤，最后层析分离得到纯化的包被TP抗原。
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