[发明专利]一种多引物oligo探针的制备方法

摘要

本发明公开了一种多引物oligo探针的制备方法，利用生物信息学途径设计oligo序列，根据其在基因组的位置划分为独立探针，在所有探针的oligo序列的5’端加上相同引物序列F1，不同探针的oligo序列的3’端加上不同的引物序列(R1‑R8)用以探针的扩增和区分，通过人工合成可一次制备8个不同的单链oligo探针。该方法可将一个oligo探针序列库拆分为8个探针，消除了oligo探针库无法拆分的弊端，本发明的多引物oligo探针制备方法提高了FISH技术在更为精细的植物分子细胞遗传学研究中的应用能力，有助于FISH技术的进一步发展。

主权项

1.一种多引物oligo探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)oligo探针序列的设计：通过Repeat Masker软件过滤基因组重复序列，将剩余序列设计成简短oligo片段，通过BLAST去除含有多个比对位点的oligo片段，得到单一拷贝的oligo序列，根据oligo序列在基因组的位置划分区间，每个区间的oligo序列组成一个oligo探针，在所有探针的oligo序列的5’端加上相同的引物序列F1，在不同探针的oligo序列的3’端分别加上不同的引物序列R1‑R8；(2)Oligo探针的制备：以oligo探针序列库为模板，5’端通用引物F和3’端不同的引物序列R1_f‑R8_f组成不同引物对，通过PCR的方式扩增得到8个不同的oligo探针DNA，再体外转录成RNA，再用带有荧光标记物的3’端引物序列R1_f‑R8_f进行反转录得到DNA/RNA杂链，再水解掉杂链中的RNA链，得到8个不同的单链oligo探针。