[发明专利]一种工业化提取卵转铁蛋白的方法及其蛋白铁产品有效
| 申请号： | 201910470280.5 | 申请日： | 2019-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN110204609B | 公开（公告）日： | 2022-01-07 |
| 发明（设计）人： | 马美湖;石梦玲;金永国 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C07K14/79 | 分类号： | C07K14/79;C07K1/34;A61K38/40;A61P3/12 |
| 代理公司： | 北京中济纬天专利代理有限公司 11429 | 代理人： | 焦伟丽 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明涉及蛋白质提取技术领域，具体为一种工业化提取卵转铁蛋白的方法及其蛋白铁产品，主要使用高压脉冲电场辅助处理蛋清降低黏度和表面张力，电场分子极化作用诱导更多带电极性基团暴露，带电分子产生反复剧烈运动，这种运动破坏了卵黏蛋白纤维状结构，使卵黏蛋白与卵类黏蛋白、溶菌酶等可等可溶性蛋白质形成的复合物解体，浓厚蛋白稀薄化，粘度进一步降低，分子分散起到很好的辅助分离的效果，有助于后期超滤分离，提高蛋白得率；通过改用亚铁与鸡蛋清中卵转铁蛋白进行鳌合，不仅可以增强卵转铁蛋白的结构稳定性使其后期可以加入高浓度乙醇进行进一步纯化，而且人体更易于吸收二价铁。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 工业化 提取 铁蛋白 方法 及其 蛋白 产品 | ||
【主权项】：
1.一种工业化提取卵转铁蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)蛋清的预处理：将鸡蛋清洗干净后分离出蛋清，采用电动搅拌器缓慢搅拌蛋清至浓厚蛋白变均匀；(2)高压脉冲电场处理：将(1)中蛋清进行高压脉冲电场处理，电场分子极化作用诱导更多带电极性基团暴露，诱导带电分子产生反复剧烈运动，破坏了卵黏蛋白纤维状结构，使卵黏蛋白与卵类黏蛋白、溶菌酶等可溶性蛋白质形成的复合物解体，浓厚蛋白稀薄化，粘度进一步降低，分子分散；(3)加入FeSO4或FeCl2溶液进行鳌合：将搅拌均匀的蛋清加双蒸水进行等体积稀释后，加入NaHCO3和NaCl充分溶解后加入FeSO4或FeCl2溶液进行充分鳌合；(4)初次加入无水乙醇：缓慢加入无水乙醇(终浓度30％～50％)后立即离心取上清液，并用纱布将上清液中悬浮的杂质滤过；(5)二次加入无水乙醇：将(4)中的上清液中缓慢加入无水乙醇(终浓度52％～66％)后静置于4℃冰箱后进行离心取沉淀并充分溶解；(6)抽滤：抽滤装置连接真空泵进行抽滤(5)中的溶液；(7)两次超滤：将抽滤后的溶液进行两次超滤，不断加水进行浓缩，除去乙醇、盐分、未与卵转铁蛋白鳌合的多余的亚铁离子以及分子量小于卵转铁蛋白的部分杂蛋白；(8)真空冷冻干燥：将浓缩后的卵转铁蛋白溶液装入冻干盒并放入‑20℃冰箱先进行预冻后，再放入冻干机冻干，冷冻干燥的条件为温度‑50℃，真空度0.1Pa，时间为36h；(9)回收乙醇：步骤(7)中小于超滤膜分子量一端的液体采用旋转蒸发仪进行悬蒸回收乙醇，旋转蒸发仪的参数设定为压力1Mpa，温度40～45℃；(10)粉碎：用粉碎机将冻干的蛋白打碎成细粉后过筛，过筛目数为100目。
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- 2022-05-31 - 2022-07-26 - C07K14/79
- 本发明涉及基因工程领域，具体的，本发明公开了一种抗菌肽LFcinB‑W及其表达和应用。本发明以牛乳铁蛋白肽（LFcinB）为模板，将第1位、第3位及第10位氨基酸进行色氨酸（Trp）替换，设计出新型高抗菌活性的衍生肽LFcinB‑W；利用基因工程技术构建成重组表达载体pPIC9K‑LFcinB‑W，将重组表达载体电转化至毕赤酵母GS115中，通过甲醇诱导分泌性表达出衍生肽LFcinB‑W；本发明公开的衍生肽LFcinB‑W对金黄色葡萄球菌（
- 一种人乳内源性的抗菌肽及其应用-202110047565.5
- 靳艳;于文皓 - 中国科学院大连化学物理研究所
- 2021-01-14 - 2022-07-19 - C07K14/79
- 本发明涉及一种来自人乳内源性的具有微生物抑制活性的多肽化合物TLDGGFIYEAGLAPYKLRPV，其氨基酸序列为Thr‑Leu‑Asp‑Gly‑Gly‑Phe‑Ile‑Tyr‑Glu‑Ala‑Gly‑Leu‑Ala‑Pro‑Tyr‑Lys‑Leu‑Arg‑Pro‑Val。多肽TLDGGFIYEAGLAPYKLRPV具有对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的广泛抑制活性，作为预防和/或降低新生儿由微生物引起的肠道感染疾病的药物和/或保健品或者新型婴儿配方食品的添加剂具有良好的应用前景。
- 类人乳铁蛋白肽及其应用-202011612816.1
- 项琪;黄亚东;肖雪;倪佩红 - 广州暨南大学医药生物技术研究开发中心有限公司;广州肽能基因生物工程有限公司
- 2020-12-30 - 2022-05-03 - C07K14/79
- 本发明公开了一种类人乳铁蛋白肽，其分子结构为人乳铁蛋白N端α‑螺旋区14‑31残基的可溶性多肽Lfcin结构类似物，保留有与Lfcin相同的折叠结构，所述类人乳铁蛋白肽为具有不大于35个氨基酸长度的多肽，其氨基酸序列包括含有（1）或（2）的氨基酸序列。类乳铁蛋白肽与来源于人乳铁蛋白N‑末端α‑螺旋区或牛乳铁蛋白N‑末端α‑螺旋区结构类似，通过结构模拟设计系列类似结构物，利用基因工程获取多肽产物，测试合成的多肽产物在较低浓度范围内对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、假单胞菌和痤疮丙酸杆菌等病原菌具有显著抑制活性，但不影响乳酸杆菌等益生菌的正常生长，对皮肤微生态具有调节作用。可应用于大健康，如化妆品和食品等领域。
- 一种制备具有所需铁饱和度的乳铁蛋白的方法-201810713582.6
- 罗述博;王彩云;杨蕾蕾;程英;云战友;杨吉武 - 内蒙古伊利实业集团股份有限公司
- 2018-06-29 - 2022-05-03 - C07K14/79
- 本发明提供了一种制备具有所需铁饱和度的乳铁蛋白的方法，该方法包括：准备饱和乳铁蛋白溶液；采用缓冲液调节饱和乳铁蛋白溶液的pH值；其中，是根据所需铁饱和度确定所调节的pH值；超滤，制备具有所需铁饱和度的乳铁蛋白产品。本发明的方法可有针对性的制备不同铁饱和度的乳铁蛋白，方法操作简便，效率高，调节精度高。
- 罗非鱼血清转铁蛋白的纯化方法及其应用-202210077205.4
- 尹晓雪;木亮亮;叶剑敏;陈诺;綦伟伟 - 华南师范大学
- 2022-01-24 - 2022-04-26 - C07K14/79
- 本发明提供了一种罗非鱼血清转铁蛋白的纯化方法，采用PEG 4000溶液分级沉淀、饱和硫酸铵溶液沉淀、配体亲和层析和免疫亲和层析相结合的方式得到纯化的罗非鱼血清转铁蛋白，属于蛋白质纯化技术领域。该纯化方法简便、高效，得到的罗非鱼血清转铁蛋白纯度高，且不破坏罗非鱼血清转铁蛋白的活性和稳定性。本发明的罗非鱼血清转铁蛋白能有效抑制病原菌，大大降低罗非鱼由于链球菌、单胞菌感染而造成的死亡，填补了硬骨鱼血清转铁蛋白高效纯化方法和相关功能的空白，同时在研究鱼类先天免疫系统以及抵御病原菌感染的工作中具有重要的指导意义。
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