[发明专利]一种获取雪线酵母菌的方法

摘要

本发明公开了一种获取雪线酵母菌的方法，属于菌种获取方法技术领域。获取方法包括以下步骤：S1、收集菌源，收集雪线附近土壤表层下1‑10cm的土壤；S2、分离，从土样中菌种进行分离；S3、培养；S4、纯化，对土样中的酵母菌进行提纯；S5、活化，对提纯的酵母菌进行活化；S6、扩大，对菌种进行扩大生产；S7、菌种保藏。本发明提供了一种获取雪线酵母菌的方法，能够解决酵母菌活性在冷冻‑融解过程中对活性产生严重的影响的问题；具有提取效率高、纯度高的优点。

主权项

1.一种获取雪线酵母菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、收集菌源，采用无菌的采集箱采取高山雪线附近土壤表层下1‑10cm的土壤，将土壤装入灭菌的牛皮纸袋内，在冷冻、干燥的条件下保存；S2、分离，首先制备菌悬液，将菌源加入到盛有无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的锥形瓶中，振荡20min，制成10^‑2的菌源悬液，采用无菌水或无菌生理盐水将10^‑2的菌源悬液进一步的稀释成10^‑4、10^‑5、10^‑6三个稀释度的菌源悬液；然后分离，在培养皿中倾注10‑15ml的豆芽汁葡萄糖培养基，采用无菌移液管吸取0.08‑0.12ml的菌源悬液滴入豆芽汁葡萄糖培养基平板上，每个稀释度做2‑3个平行皿，在火焰旁使用无菌玻璃涂棒将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散；S3、培养，将接种后的豆芽汁葡萄糖培养基平板倒置于28‑32℃的恒温箱中，培养2‑4天；S4、纯化，用接种环挑取单个酵母菌菌落，在豆芽汁葡萄糖培养基平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落，将菌种放入冷冻管中进行冷冻保存；S5、活化，将冷冻管中豆芽汁葡萄糖培养基在室温下达到室温后，振动均匀，转入含有豆芽汁葡萄糖培养基的试管中在25±1℃的温度下进行2‑3代的培养复壮；S6、扩大，将活化后的试管内的豆芽汁葡萄糖培养基轻轻振荡均匀，全部接入加有豆芽汁葡萄糖培养基的巴氏瓶或卡氏罐中培养扩大；S7、菌种保藏，菌种以固体斜面形式在0‑4℃温度下冷藏保藏，每三个月进行活化一次。