[发明专利]一种体外检测CYP11B1基因外显子拷贝数变异的方法

摘要

本发明涉及一种体外检测CYP11B1基因外显子拷贝数变异的方法，属于基因外显子拷贝数变异的方法技术领域。通过设计了一组特异性的MLPA探针，实现了CYP11B1基因全部9个外显子片段拷贝数变异的检测，大大简化了对CYP11B1基因外显子缺失或重复检测的实验操作。步骤1：探针在试剂盒中进行稀释；步骤2：采集受检者标本；步骤3：高温变性基因组DNA；步骤4：探针混合液联合或不联合参考探针混合液与变性后的基因组DNA进行杂交反应；步骤5：结合序列；步骤6：进行PCR扩增；步骤7：将PCR产物进行毛细管电泳；步骤8：分析、计算相对拷贝数变异信息。本发明首次实现了基于多重连接依赖探针扩增技术原理检测CYP11B1基因全部9个外显子拷贝数变异的特异性方法。

主权项

1.一种体外检测CYP11B1基因外显子拷贝数变异的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：将本发明的13对探针或其中1对或数对探针在试剂盒中进行稀释以形成后续实验需要的自设探针混合液；步骤2：采集受检者标本，如外周血，提取基因组DNA；步骤3：高温变性基因组DNA；步骤4：将上述自设探针混合液联合或不联合参考探针混合液，与变性后的基因组DNA进行杂交反应；步骤5：用连接酶将完全配对杂交并紧邻的左探针3’端与右探针5’相连接而形成一条完整的探针，该探针两端包含后续PCR引物结合序列；步骤6：使用PCR混合液和DNA聚合酶进行PCR扩增；步骤7：将PCR产物进行毛细管电泳；步骤8：本发明所设计的每对探针所扩增产物长度是唯一的，通过片段分析软件可计算得出待测样品DNA的CYP11B1基因全部9个外显子或其中一个或数个外显子的片段相对拷贝数变异信息。