[发明专利]一种体外检测CYP11B1基因外显子拷贝数变异的方法

权利要求书

1.一种非诊断目的的体外检测CYP11B1基因外显子拷贝数变异的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：将13对探针在试剂盒中进行稀释以形成后续实验需要的自设探针混合液；

其中，所述13对探针具体为：

用于互补配对结合CYP11B1基因1号外显子及其邻近区域的探针对，其左探针为SEQ IDNO:1，右探针为SEQ ID NO:2；

用于互补配对结合CYP11B1基因2号外显子及其邻近区域的探针对，其左探针为SEQ IDNO:3，右探针为SEQ ID NO:4；

用于互补配对结合CYP11B1基因3号外显子及其邻近区域的探针对，其左探针为SEQ IDNO:5，右探针为SEQ ID NO:6；

用于互补配对结合CYP11B1基因4号外显子及其邻近区域的探针对，其左探针为SEQ IDNO:7，右探针为SEQ ID NO:8；

用于互补配对结合CYP11B1基因5号外显子及其邻近区域的探针对，其左探针为SEQ IDNO:9，右探针为SEQ ID NO:10；

用于互补配对结合CYP11B1基因6号外显子及其邻近区域的探针对，其左探针为SEQ IDNO:11，右探针为SEQ ID NO:12；

用于互补配对结合CYP11B1基因7号外显子及其邻近区域的探针对，其左探针为SEQ IDNO:13，右探针为SEQ ID NO:14；

用于互补配对结合CYP11B1基因8号外显子及其邻近区域的探针对，其左探针为SEQ IDNO:15，右探针为SEQ ID NO:16；

用于互补配对结合CYP11B1基因9号外显子及其邻近区域的探针对，其左探针为SEQ IDNO:17，右探针为SEQ ID NO: 18；

用于互补配对结合CYP11B1基因3’端约2kb序列区域的探针对，其左探针为SEQ ID NO:19，右探针为SEQ ID NO:20；

用于互补配对结合CYP11B1基因5’端约15kb序列区域的探针对，其左探针为SEQ IDNO:21，右探针为SEQ ID NO:22；

用于互补配对结合CYP11B2基因3’端约3kb序列区域的探针对，其左探针为SEQ ID NO:23，右探针为SEQ ID NO:24；

用于互补配对结合CYP11B2基因5’端约4kb序列区域的探针对，其左探针为SEQ ID NO:25，右探针为SEQ ID NO:26；

步骤2：采集受检者标本，如外周血，提取基因组DNA；

步骤3：高温变性基因组DNA；

步骤4：将上述自设探针混合液联合或不联合参考探针混合液，与变性后的基因组DNA进行杂交反应；

步骤5：用连接酶将完全配对杂交并紧邻的左探针3’端与右探针5’相连接而形成一条完整的探针，该探针两端包含后续PCR引物结合序列；

步骤6：使用PCR混合液和DNA聚合酶进行PCR扩增；

步骤7：将PCR产物进行毛细管电泳；

步骤8：每对探针所扩增产物长度是唯一的，通过片段分析软件可计算得出待测样品DNA的CYP11B1基因全部9个外显子的片段相对拷贝数变异信息。

2.根据权利要求1所述的一种非诊断目的的体外检测CYP11B1基因外显子拷贝数变异的方法，其特征在于，所述试剂盒包含步骤1中所述的13对探针，所述SEQ ID NO:2，SEQ IDNO:4，SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:12，SEQ ID NO:14，SEQ IDNO:16，SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:22，SEQ ID NO:24，SEQ ID NO:26的5’端的第1个碱基需要磷酸化修饰。

3.根据权利要求1所述的一种非诊断目的的体外检测CYP11B1基因外显子拷贝数变异的方法，其特征在于，所述试剂盒还包含以下一种或多种试剂：

用于从样品提取基因组DNA的试剂；

用于所述探针进行多重连接依赖探针扩增反应的试剂；

用于处理扩增产物以使得扩增产物能用于毛细管电泳的试剂；

连接酶链反应试剂，如杂交反应液、连接酶、连接缓冲液A、连接缓冲液B、PCR混合液和DNA聚合酶。