[发明专利]一种I型牛疱疹病毒重组蛋白及其制备方法和应用在审

专利信息
申请号: 201811604133.4 申请日: 2018-12-26
公开(公告)号: CN109593121A 公开(公告)日: 2019-04-09
发明(设计)人: 李晓光;刘毅 申请(专利权)人: 杭州亿米诺生物科技有限公司
主分类号: C07K14/03 分类号: C07K14/03;C07K16/08;C12N15/70;G01N33/569
代理公司: 杭州信义达专利代理事务所(普通合伙) 33305 代理人: 施建勇
地址: 310000 浙江省杭州市*** 国省代码: 浙江;33
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明公开了一种I型牛疱疹病毒重组蛋白,涉及生物医药技术领域,一种I型牛疱疹病毒重组蛋白的制备方法包括以下步骤:(1)查找I型牛疱疹病毒中含有主要抗原决定簇的gD抗原;(2)优化I型牛疱疹病毒gD抗原基因的密码子,合成核酸序列并进行表达;(3)构建针对I型牛疱疹病毒gD抗原的单链抗体,调取单链抗体scFv的基因;(4)重组优化的I型牛疱疹病毒gD抗原基因和针对I型牛疱疹病毒gD抗原的单链抗体scFv的基因,并进行诱导表达;(5)纯化及复性I型牛疱疹病毒重组蛋白。本发明在开发单克隆抗体的基础上又进行重组抗体技术开发单链抗体,易于在细胞中表达,可以在真核或者原核细胞中表达,可大量生产,成本较低。
搜索关键词: 牛疱疹病毒 单链抗体 重组蛋白 抗原 抗原基因 制备方法和应用 合成核酸序列 生物医药技术 单克隆抗体 抗原决定簇 技术开发 诱导表达 原核细胞 重组抗体 密码子 基因 调取 复性 构建 真核 制备 优化 查找 细胞 开发
【主权项】:
1.一种I型牛疱疹病毒重组蛋白,其特征在于:包括I型牛疱疹病毒抗原和I型牛疱疹病毒单链抗体;所述I型牛疱疹病毒抗原为含有主要抗原决定簇的gD抗原;所述I型牛疱疹病毒单链抗体为scFv。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于杭州亿米诺生物科技有限公司,未经杭州亿米诺生物科技有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201811604133.4/,转载请声明来源钻瓜专利网。

同类专利
  • 一种鲤疱疹病毒Ⅱ型衣壳蛋白ORF66的原核表达、蛋白纯化方法-201910687629.0
  • 李强;栾林林 - 盐城工学院
  • 2019-07-29 - 2019-11-05 - C07K14/03
  • 本发明首先公开了一种编码鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白的基因的核苷酸序列;然后公开了所述基因编码的鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白的氨基酸序列;接着公开了包含所述基因的重组载体,最后公开了一种鲤疱疹病毒Ⅱ型衣壳蛋白ORF66的原核表达、蛋白纯化方法。到目前为止,尚未有人体外表达过鲤疱疹病毒(CyHV‑2)ORF66蛋白,而本发明通过基因工程方法,首次成功表达纯化了鲤疱疹病毒(CyHV‑2)ORF66蛋白。
  • 卡波氏肉瘤相关病毒蛋白ORF57的C端片段其抗体制备方法和应用-201910449580.5
  • 黄海;薛辰;蓝柯 - 上海大学
  • 2019-05-28 - 2019-08-23 - C07K14/03
  • 本发明公开一种卡波氏肉瘤相关病毒蛋白ORF57的C端片段其抗体制备方法和应用。通过克隆该多肽片段的基因并实现原核表达,纯化后得到该多肽片段。以该多肽片段作为抗原,制备兔抗血清,分离纯化抗血清,获得抗ORF57蛋白的多克隆抗体。细胞学和分子生物学实验研究表明,该抗体能够在细胞内和细胞外特异性结合ORF57蛋白,能够检测到进入细胞核内的ORF57蛋白。因此,该多克隆抗体可以用于卡波氏肉瘤相关病毒抗原的检测识别中或制备检测活病毒感染的检测试剂盒。
  • 一种抑制鸡先天性免疫反应鸡马立克氏病病毒蛋白及其应用-201910119158.3
  • 许健;李永清;江波;刘文晓;靳换 - 北京市农林科学院
  • 2019-02-18 - 2019-06-25 - C07K14/03
  • 本发明提供了一种抑制鸡先天性免疫反应鸡马立克氏病病毒蛋白及其应用,该蛋白表达升高可增强鸡马立克氏病病毒(尤其是疫苗株)在鸡胚成纤维细胞上的复制,从而提高疫苗的免疫效力,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白;或在SEQ ID NO.1中所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性由a)衍生的蛋白。本发明还构建该蛋白基因缺失的重组马立克氏病病毒研究结果发现,缺失了该蛋白的MDV病毒增强了MDV诱导IFN‑I的产生,从而为设计抗马立克氏病病毒强毒感染的药物提供物质基础。该蛋白过表达ICP0蛋白的鸡胚成纤维细胞能够增强MDV的复制。
  • 一种I型牛疱疹病毒重组蛋白及其制备方法和应用-201811604133.4
  • 李晓光;刘毅 - 杭州亿米诺生物科技有限公司
  • 2018-12-26 - 2019-04-09 - C07K14/03
  • 本发明公开了一种I型牛疱疹病毒重组蛋白,涉及生物医药技术领域,一种I型牛疱疹病毒重组蛋白的制备方法包括以下步骤:(1)查找I型牛疱疹病毒中含有主要抗原决定簇的gD抗原;(2)优化I型牛疱疹病毒gD抗原基因的密码子,合成核酸序列并进行表达;(3)构建针对I型牛疱疹病毒gD抗原的单链抗体,调取单链抗体scFv的基因;(4)重组优化的I型牛疱疹病毒gD抗原基因和针对I型牛疱疹病毒gD抗原的单链抗体scFv的基因,并进行诱导表达;(5)纯化及复性I型牛疱疹病毒重组蛋白。本发明在开发单克隆抗体的基础上又进行重组抗体技术开发单链抗体,易于在细胞中表达,可以在真核或者原核细胞中表达,可大量生产,成本较低。
  • 抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒的疫苗药物靶点SIM-201310431879.0
  • 蔡启良;朱彩霞;蔡屾 - 复旦大学
  • 2013-09-18 - 2018-01-19 - C07K14/03
  • 本发明属生物医学领域,涉及抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒的疫苗药物靶点SIM,具体涉及一种抗珀斯肉瘤疱疹病毒的SIM多肽序列及其在制备疫苗中的用途。所述SIM结构域对卡珀斯肉瘤疱疹病毒的基因组稳定、持续遗传等维护潜伏期感染有重要作用;其可识别由SUMO‑2修饰KAP1和Sin3A等多种转录因子的转录沉默复合物;其缺失可影响KSHV病毒基因组的稳定遗传和潜伏感染,以及提高微环境应激条件下KSHV病毒启动裂解生活周期和破坏宿主细胞的效率,可作为抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒的治疗靶点。本发明还涉及所述多肽序列的出发表位的人工改造核苷酸序列、整个SIM亚功能结构域不同组装顺序相应核苷酸序列和其编码的蛋白质产物,以及在抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒方面的治疗潜在用途。
  • 鸭瘟病毒UL15基因exonI重组蛋白及其制备方法和应用-201410520084.1
  • 杨乔;程安春;汪铭书;孙昆峰;贾仁勇;朱德康;陈舜;刘马峰 - 四川农业大学
  • 2014-09-30 - 2017-10-31 - C07K14/03
  • 本发明公开了鸭瘟病毒UL15基因exonI重组蛋白及其制备方法和应用,鸭瘟病毒UL15基因exonI重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示,其制备方法是将含有重组表达载体的大肠杆菌Rossetta在含有Amp的LB液体培养基中培养过夜,然后取菌液转接入新鲜的含Amp的LB液体培养基中,培养至OD600为0.4时,加入IPTG诱导培养,得含鸭瘟病毒UL15基因exonI重组蛋白的培养液,所得重组蛋白具有免疫活性,能够与鸭瘟病毒抗体特异性结合,可作为鸭瘟病毒抗体的检测试剂;还可以作为抗原制备多克隆抗体,为鸭瘟病毒的检测奠定了基础。
  • 用于检测人类疱疹病毒8型感染的多肽及试剂盒-201710030268.3
  • 程林;赵方;唐娴;王辉;陈志伟;杜飞嫦;何琳 - 深圳市第三人民医院
  • 2017-01-17 - 2017-06-13 - C07K14/03
  • 本发明提供了人类疱疹病毒8型来源的多肽,以及利用该多肽开发的一种间接ELISA抗体检测试剂盒,本发明还提供了所述的多肽和间接ELISA抗体检测试剂盒在检测人类疱疹病毒8型感染中的应用。经实验证明,本发明提供的用于检测人类疱疹病毒8型感染的间接ELISA抗体检测试剂盒不仅可以对人类疱疹病毒8型特异性抗体进行定性检测,还可以对人血清样品进行高通量检测,以达到早期、快速诊断人类疱疹病毒8型感染的目的,从而对人类疱疹病毒8型感染的诊断、流行病学调查和病原监测具有较高的临床使用及推广价值。
  • 小片段gG抗原及其在检测伪狂犬病毒gG抗体中的应用-201510587831.8
  • 阮文科;郭娇娇;王真;吴艳花;崔德凤 - 北京农学院
  • 2015-09-15 - 2017-03-22 - C07K14/03
  • 本发明公开了一种用于检测伪狂犬病毒抗体的小片段gG抗原、试剂盒以及检测伪狂犬病毒抗体的方法。该小片段gG抗原在大肠杆菌中主要以可溶的形式表达,表达产物用间接ELISA分析具有免疫原性,且表达产物不需变性、复性处理,提纯简便易行。以初提纯的表达产物作为抗原,可以检测样品中的gG抗体,可以鉴别gG基因缺失疫苗免疫猪和感染野毒的血清学阳性猪,敏感性强、特异性高、操作简便,适合于临床大量检测。
  • 一种EB病毒抗原制备方法及利用该抗原制备的检测EB病毒抗体的快速检测试剂盒-201610590575.2
  • 李克生;杜惠芬;曾潮宁;范丽赟;许菲菲 - 兰州雅华生物技术有限公司
  • 2016-07-26 - 2016-12-07 - C07K14/03
  • 本发明涉及一种EB病毒基因工程人工表达抗原;制备该抗原的方法,该方法人工合成自身融合EB病毒衣壳蛋白抗原基因序列,构建原核表达载体,大肠杆菌表达EB病毒衣壳蛋白抗原,采用透析法、梯度稀释法和凝胶层析法复性包涵体,获得具有三维结构和免疫活性的重组EB病毒衣壳蛋白抗原;一种检测EB病毒抗体的快速检测方法,该方法包括应用EB病毒衣壳蛋白抗原;一种用于EB病毒抗体检测的快速检测试剂盒,该试剂盒包含EB病毒衣壳蛋白抗原,可直接用于全血检测。该试剂盒包含风湿因子处理垫,可以去除样品中的风湿因子,直接检测样品中的IgM。根据本发明,提供了一种EB病毒抗原,该抗原具有高度的特异性。本发明提供了制备该抗原的方法,快速测定EB病毒抗体的方法,以及用于快速测定EB病毒抗体的试剂盒。
  • 鸭疱疹病毒1型UL7截短重组蛋白及其制备方法和应用-201410347473.9
  • 汪铭书;程安春;黄杰;贾仁勇;杨乔;孙昆峰;陈舜;刘马蜂;朱德康;陈孝跃 - 四川农业大学
  • 2014-07-21 - 2014-10-01 - C07K14/03
  • 本发明公开了氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的鸭疱疹病毒1型(AHV-1)UL7截短重组蛋白,其编码基因,重组表达载体,工程菌,并利用工程菌制备该截短重组蛋白以及该截短重组蛋白的多克隆抗体;该截短重组蛋白具有与天然AHV-1UL7蛋白相似的免疫反应活性,能够与AHV-1抗体特异性结合,可作为检测AHV-1抗体的试剂应用,由于该截短重组蛋白非全细菌,应用其进行检测时无散毒危险,且制备方法简单,适于工业化大规模生产,能够实现产品的标准化,利于不同实验室之间的结果比较;该截短重组蛋白的多克隆抗体可作为检测AHV-1抗原的试剂,具有特异性好,与鸭肝炎病毒、雏鹅新型肠炎病毒不产生交叉反应,还可作为检测UL7蛋白在AHV-1感染宿主细胞中的定位和分布的试剂应用。
  • 鸭瘟病毒UL13截段重组蛋白、其多克隆抗体及制备方法和应用-201310557397.X
  • 汪铭书;胡溪霞;程安春;陈孝跃;贾仁勇 - 四川农业大学
  • 2013-11-11 - 2014-02-05 - C07K14/03
  • 本发明公开了氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的鸭瘟病毒(DPV)UL13截段重组蛋白、其编码基因、重组表达载体、工程菌以及利用工程菌制备该截段重组蛋白的方法,操作简便、成本低,适于工业化大规模生产,能够实现产品的标准化,利于不同实验室之间的结果比较;所得截段重组蛋白具有免疫反应活性,能够与DPV抗体特异性结合,可以作为检测DPV抗体的检测抗原,检测准确度高、特异性强、无交叉反应、无散毒危险;本发明还以DPV UL13截段重组蛋白为抗原免疫动物成功获得了多克隆抗体,该多克隆抗体可以作为检测DPV的检测抗体,具有检测特异性强、无交叉反应等优点。
  • 鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白及其制备方法-201110177128.1
  • 程安春;杨晓圆;汪铭书;陈孝跃 - 四川农业大学实验动物工程技术中心
  • 2011-06-28 - 2011-11-23 - C07K14/03
  • 本发明涉及生物工程领域,特别涉及鸭瘟病毒gG截段重组蛋白及其制备方法,其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示,核苷酸序列如SEQIDNO:2所示;然后利用基因工程技术,将其核苷酸序列进行克隆的基础上,将其与原核表达载体pET-32a(+)连接,成功转化大肠杆菌BL21(DE3)表达系统进行诱导、表达的基因工程产品;该蛋白的表达形式是gGM/His融合蛋白,表达的融合蛋白分子量为50kDa,将产品设计为融合表达一是考虑便于纯化,二是能增加表达蛋白的免疫原性;经原核表达系统表达后的产品经Westernblot进行鉴定后表面具有与天然蛋白相似的免疫反应活性。
  • vMIP-II蛋白的固相合成方法-201110112488.3
  • 孙晗笑;莫雪梅;李秀英;张光 - 暨南大学
  • 2011-05-03 - 2011-11-16 - C07K14/03
  • 本发明公开了一种vMIP-II蛋白的固相合成方法,其步骤为:反应瓶加入二甲基二氯硅烷通风过夜使反应瓶硅烷化,乙醇粗洗后置于-80℃冷却,再次洗涤烘干,称取树脂置于反应瓶中,加入3倍于树脂体积的DCM(二氯甲烷)溶液,溶胀30min后排空液体,然后在多肽合成仪上按偶连氨基酸、茚三酮反应检测和α-氨基脱保护的循环从C端到N端进行,直到全部氨基酸残基都偶连上去。偶连完成后,取下反应瓶用DCM清洗,抽干树脂后用预冷的切割液切割,切割下来的多肽用HPLC进行纯化。多肽纯化在Waters600E高压液相色谱仪上,用Kromasil100-5C18柱子进行高压反相色谱,收集的目的峰多肽即为vMIP-II蛋白。
  • 检测鸭瘟病毒抗体的UL55重组原核表达蛋白及制备方法-201110047060.5
  • 程安春;吴英;汪铭书;陈孝跃 - 四川农业大学实验动物工程技术中心
  • 2011-02-28 - 2011-09-07 - C07K14/03
  • 本发明公开了一种用于检测鸭瘟病毒抗体的UL55重组原核表达蛋白及制备方法,该检测鸭瘟病毒抗体的重组原核表达蛋白由SEQ ID NO:2的氨基酸序列表定义;是SEQ ID NO:1核苷酸序列的原核表达产物。制备方法包括:(1)设计扩增DPV-UL55基因的特异性引物;(2)通过PCR扩增获得UL55基因片段;(3)对UL55基因进行克隆、测序鉴定;(4)将UL55基因定向亚克隆至pET32a原核表达载体;(5)UL55基因在大肠杆菌中的诱导表达;(6)UL55基因表达蛋白的纯化;(7)重组UL55蛋白的复性和检测。本产品可以作为检测鸭瘟病毒抗体的间接ELISA和Western Blot方法的检测抗原,也可以作为预防鸭瘟病毒感染的基因工程亚单位疫苗。
专利分类
×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

400-8765-105周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top