[发明专利]食醋中荧光纳米粒子体内分布和生物安全性评价方法

摘要

本发明公开了一种评价食醋中荧光纳米粒子体内分布和生物安全性的方法，包括使用不同浓度的食醋中荧光纳米粒子处理大鼠大鼠肾小管上皮细胞，测定细胞存活率；选择使NRK细胞存活率达到50％～90％的食醋荧光纳米粒子的浓度作为潜在危险浓度，检测细胞凋亡情况；使用细胞存活率达到90％以上的安全浓度进行NRK细胞成像实验，观察食醋中荧光纳米粒子在细胞中的分布情况；通过给BALB/c小鼠灌胃食醋中荧光纳米粒子，经过不同时间处理后，观察食醋中荧光纳米粒子在小鼠体内的分布；最后通过溶血实验测定食醋荧光纳米粒子对小鼠血红细胞的破坏程度。本发明为食醋中荧光纳米粒子的安全性提供了可靠的科学依据，也为其他纳米材料的安全性评价提供参考。

主权项

1.一种食醋中荧光纳米粒子体内分布和生物安全性的评价方法，其特征在于，包括以下步骤：A、将大鼠肾小管上皮细胞接种在细胞培养基中培养，待大鼠肾小管上皮细胞生长至对数期时进行消化，消化后的大鼠肾小管上皮细胞悬液进行贴壁培养24 h，得到贴壁生长的大鼠肾小管上皮细胞；B、将食醋中荧光纳米粒子分散在细胞培养基中，漩涡震荡，得到荧光纳米粒子溶液；C、将步骤B中的荧光纳米粒子溶液梯度稀释成若干浓度，分别加入到步骤A得到的贴壁生长的大鼠肾小管上皮细胞中，培养24 h；D、将培养后的大鼠肾小管上皮细胞在四氮唑蓝溶液中继续培养，向四氮唑蓝溶液培养后的大鼠肾小管上皮细胞中加入二甲基亚砜，在波长下测定吸光值，作为实验组结果，设置对照组，对照组的结果为将大鼠肾小管上皮细胞依次经细胞培养基、四氮唑蓝溶液和二甲基亚砜溶液处理后测得的吸光度值，通过实验组结果和对照组结果计算得到细胞存活率；E、用步骤D中得到的潜在危险浓度的食醋荧光纳米粒子溶液处理步骤A中消化后的对数期大鼠肾小管上皮细胞24 h，经胰酶消化后形成单细胞悬液，用磷酸盐缓冲溶液冲洗后离心，加入流式细胞缓冲液，测定细胞的生存情况；设置对照组，对照组的结果为将大鼠肾小管上皮细胞依次经细胞培养基、磷酸盐缓冲溶液和流式细胞缓冲溶液处理后测得的细胞生存情况，通过实验组结果和对照组结果计算得到细胞凋亡率；F、将幼鼠分为两组，对照组和实验组，将食醋中荧光纳米粒子分散在超纯水中，漩涡震荡，得到荧光纳米粒子溶液，小鼠口服的在一定浓度条件下暴露，实验组小鼠口服荧光纳米粒子溶液，对照组小鼠口服NaCl水溶液，分别取对照组和实验组口服不同时间的小鼠主要器官观察食醋荧光纳米粒子在小鼠器官中的积累情况；G、将食醋中荧光纳米粒子分散在磷酸盐缓冲溶液中，漩涡震荡，得到荧光纳米粒子溶液并梯度稀释成若干浓度；H、取对照组小鼠血液，将血液离心除去血清获得血红细胞，用磷酸盐缓冲溶液冲洗后备用，在细胞培养液中加入步骤G中得到的荧光纳米粒子溶液，室温培养120 min，阴性对照组为仅向细胞培养液中加入等体积磷酸盐缓冲溶液以细胞形态维持不变，阳性对照组为仅加入等体积超纯水使细胞破裂，120 min孵育之后离心取上清液在541 nm处测吸光度；I、根据以上试验综合评价食醋中荧光纳米粒子的生物分布和生物安全性。