[发明专利]食醋中荧光纳米粒子体内分布和生物安全性评价方法

说明书

本发明公开了一种评价食醋中荧光纳米粒子体内分布和生物安全性的方法，包括使用不同浓度的食醋中荧光纳米粒子处理大鼠大鼠肾小管上皮细胞，测定细胞存活率；选择使NRK细胞存活率达到50％～90％的食醋荧光纳米粒子的浓度作为潜在危险浓度，检测细胞凋亡情况；使用细胞存活率达到90％以上的安全浓度进行NRK细胞成像实验，观察食醋中荧光纳米粒子在细胞中的分布情况；通过给BALB/c小鼠灌胃食醋中荧光纳米粒子，经过不同时间处理后，观察食醋中荧光纳米粒子在小鼠体内的分布；最后通过溶血实验测定食醋荧光纳米粒子对小鼠血红细胞的破坏程度。本发明为食醋中荧光纳米粒子的安全性提供了可靠的科学依据，也为其他纳米材料的安全性评价提供参考。

技术领域

本发明涉及一种食醋中荧光纳米粒子体内分布和生物安全性的评价方法。

背景技术

食品在加工过程中，原料中的有机分子和低聚物受热发生一系列反应，这与化学合成中通过水热/溶剂热法合成荧光纳米粒子的过程类似，食醋主要由高粱、大曲、麸皮、谷康等原料经糊化、发酵、熏醅等工艺酿制而成，在生产过程中存在无可避免地对原料进行加热的过程，在此过程中，谷物原料中的蛋白质和多糖被降解为短肽链、氨基酸和寡糖，这些物质之间相互发生反应，形成了食醋中的荧光纳米粒子，这种荧光纳米粒子是由分散的类球状碳颗粒组成，尺寸极小，10 nm以下，其含有的主要元素为碳（C）、氢（H）、氧（O）、氮（N），主要化学结构有羟基（-OH），羧基（-COOH），羰基（-C=O）和氨基（-NH2）等，它还具有良好的水溶性且其水溶液在365 nm紫外光照射下能发出明亮的蓝色荧光，故称之为荧光纳米粒子。食品纳米粒子安全问题一直是人们关注的焦点，食醋作为日常生活中必不可少的调味品，对其安全性的研究十分重要，目前，人们对含有新型荧光纳米粒子的食品的看法通常是负面的，然而在世界上任何一个地方，都还没有关于食品中荧光纳米粒子的强制性标签，消费者很难了解荧光纳米粒子的相关信息，也不确定在商业化的产品中是否存在荧光纳米粒子，因此，对食醋中荧光纳米粒子的体内分布情况以及生物安全性研究十分重要。目前，报导的对于纳米材料的安全性的评价方法包括构建细胞模型与动物模型，观察纳米材料在细胞中的分布和对细胞增殖能力以及凋亡情况的影响，寻找纳米材料影响细胞增殖与凋亡的原因，全面解析纳米材料在细胞水平的生物安全性。

发明内容

本发明的目的是提供一种评价食醋中荧光纳米粒子体内分布和生物安全性的方法。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：一种评价食醋中荧光纳米粒子体内分布和生物安全性的方法，包括以下步骤：

A、将大鼠肾小管上皮细胞接种在细胞培养基中培养，待大鼠肾小管上皮细胞生长至对数期时进行消化，消化后的大鼠肾小管上皮细胞悬液进行贴壁培养24 h，得到贴壁生长的大鼠肾小管上皮细胞；

B、将食醋中荧光纳米粒子分散在细胞培养基中，漩涡震荡，得到荧光纳米粒子溶液；

C、将步骤B中的荧光纳米粒子溶液梯度稀释成若干浓度为1.25 mg/mL、2.5 mg/mL、5mg/mL、10 mg/mL和20 mg/mL，分别加入到步骤A得到的贴壁生长的大鼠肾小管上皮细胞中，培养24 h；

D、将培养后的大鼠肾小管上皮细胞在100μL四氮唑蓝溶液中继续培养，向四氮唑蓝溶液培养后的大鼠肾小管上皮细胞中加入200μL二甲基亚砜，在492 nm波长下测定吸光值，作为实验组结果，设置对照组，对照组的结果为将大鼠肾小管上皮细胞依次经细胞培养基、四氮唑蓝溶液和二甲基亚砜溶液处理后，492 nm波长下测定吸光值，作为实验组结果测得的吸光度值，通过实验组结果和对照组结果计算得到细胞存活率；