[发明专利]一种犬类真皮成纤维细胞原代培养方法在审
| 申请号： | 201811357038.9 | 申请日： | 2018-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN109439619A | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 张安育 | 申请（专利权）人： | 合肥华盖生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 合肥道正企智知识产权代理有限公司 34130 | 代理人： | 谢伟 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥市经济技术*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种犬类真皮成纤维细胞原代培养方法，由以下步骤组成：（1）剪取成年犬胸腹处皮肤组织；（2）清洗皮肤组织，去除皮下脂肪和结缔组织，然后将皮肤组织剪碎并转移至离心管内；（3）向离心管内加入1mLⅡ型胶原酶溶液并剪成糊状，加入5mLⅡ型胶原酶混匀，置于培养箱内至组织浆液完全消化；（4）取出离心管进行离心，弃上清液，加入培养基重悬，重悬液用细胞筛过滤，所得过滤液再次离心，弃上清液，加入细胞培养液重悬，然后转移到六孔板内，加入培养液；（5）置于培养箱中静置培养48h，每天更换一次新鲜培养液，直至获得犬类真皮成纤维原代细胞。本方法操作难度低，培养程序简单且培养效率较高。 | ||
| 搜索关键词： | 皮肤组织 离心管 培养液 真皮成纤维细胞 原代培养 上清液 种犬 重悬 细胞培养技术 胶原酶溶液 细胞培养液 结缔组织 静置培养 皮下脂肪 原代细胞 培养基 成糊状 成年犬 过滤液 胶原酶 六孔板 培养箱 细胞筛 重悬液 真皮 混匀 剪取 剪碎 犬类 胸腹 去除 过滤 清洗 取出 纤维 消化 新鲜 | ||
【主权项】：
1.一种犬类真皮成纤维细胞原代培养方法，其特征在于，由以下步骤组成：（1）用无菌手术剪剪取成年犬胸腹处1cm×1cm皮肤组织一块，置于75%酒精浸泡消毒过的密封袋内迅速带入超净台；（2）在超净台内，用双抗PBS溶液清洗皮肤组织，用无菌剪刀和镊子去除皮下脂肪和结缔组织，用上述双抗PBS溶液继续清洗2‑4次，然后将皮肤组织剪碎并转移至5mL离心管内；（3）向5mL离心管内加入1mLⅡ型胶原酶溶液并将皮肤组织剪成糊状，将组织浆液转移至15mL离心管内，加入5mLⅡ型胶原酶混匀，置于37℃、5% CO2培养箱内消化，间隔2h观察消化情况直至组织浆液完全消化；（4）取出离心管进行离心，弃上清液，加入培养基重悬，重悬液用细胞筛过滤，所得过滤液再次离心，弃上清液，加入细胞培养液重悬，然后转移到六孔板内，加入培养液；（5）置于37℃、5% CO2培养箱中静置培养48h，然后用培养基清洗培养板去除杂质，每天更换一次新鲜培养液，继续培养直至获得犬类真皮成纤维原代细胞。
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- 本发明涉及一种提高骨髓间充质干细胞成脂分化效率的方法，包括MSC的提取及原代培养、MSC的传代培养和MSC的成脂分化表征。该方法控制细胞传代培养时培养液的更换量以及细胞的培养周期，得到不同数量的脂肪细胞，从而在不含有诱导因子的情况下仍能在聚苯乙烯细胞培养基底表面获得很高的MSC成脂分化效率。该方法具有体系简单、不含有额外生物因子、无细胞毒性、重复性高等特点。此方法能满足干细胞的体外培养以及临床应用的需求。
- 一种ATDC5向软骨分化的诱导方法-201610281335.4
- 任力;王迎军;薛婧晨;秦大江;裴端卿;蔡景蕾;宋文婧 - 华南理工大学
- 2016-04-28 - 2019-08-20 - C12N5/077
- 本发明公开了一种ATDC5向软骨分化的诱导方法，包括以下步骤：采用改进的micromass培养办法将已经团聚成micromass的细胞团整块吹起，随后转移到琼脂糖上悬浮软骨诱导，诱导时间为14天。本发明既满足软骨诱导所需的密集培养的条件，又可以避免与培养板直接接触而导致纤维软骨的形成，同时还可以利用琼脂糖促软骨分化的特性促进细胞的软骨分化。
- 液晶相组织工程薄膜的应用-201810107324.3
- 杨晔 - 安徽中医药大学
- 2018-02-02 - 2019-08-16 - C12N5/077
- 本发明公开了液晶相组织工程薄膜在制备促使成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转化并且促使肌成纤维细胞凋亡的诱导剂中的应用，所述的液晶相组织工程薄膜的材料，选自壳聚糖、N‑邻苯二甲酰化壳聚糖和聚丙交酯‑聚乙醇酸接枝胆甾醇多种材料中的一种或一种以上，液晶相组织工程薄膜的厚度为20微米‑50毫米，制备方法包括，步骤(1)，将液晶相组织工程薄膜的材料溶解于它的良溶剂中形成聚合物溶液；步骤(2)，将聚合物溶液的溶剂挥发完全，即可。本发明提供的液晶相组织工程薄膜在组织修复早期诱导成纤维细胞转化为肌成纤维细胞，加快细胞外基质分泌，形成细胞膜片，同时，在组织修复后期诱导肌成纤维细胞凋亡防止增生性瘢痕。
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