[发明专利]一种基于肠毒素基因的新生仔猪源大肠杆菌LAMP检测方法在审
| 申请号： | 201811356865.6 | 申请日： | 2018-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN109251988A | 公开（公告）日： | 2019-01-22 |
| 发明（设计）人： | 朱善元;成大荣;封琦;蔡树东 | 申请（专利权）人： | 江苏农牧科技职业学院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 龚拥军 |
| 地址： | 225300*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开一种基于肠毒素基因的新生仔猪源大肠杆菌LAMP检测方法，即采用ST2+肠毒素基因型大肠杆菌基因组DNA作为阳性对照，超纯水作为阴性对照，以样品基因组DNA为模板，进行LAMP检测，LAMP检测引物分别如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.4所示；然后向扩增产物中加入1000×SYBR Green I荧光染料，若出现绿色，则说明样品中含大肠杆菌；反之，则认为样品中不含大肠杆菌；本发明方法操作简单、快速便捷、灵敏度高、特异性强，为基层大肠杆菌的快速检测提供了新的技术平台。 | ||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 肠毒素基因 新生仔猪 大肠杆菌基因组 基因组DNA 技术平台 快速检测 扩增产物 特异性强 阳性对照 阴性对照 荧光染料 超纯水 灵敏度 引物 基层 | ||
【主权项】：
1.一种基于肠毒素基因的新生仔猪源大肠杆菌LAMP检测方法，其特征在于，具体步骤如下： 1）采用ST2+肠毒素基因型大肠杆菌基因组DNA作为阳性对照，超纯水作为阴性对照，以样品基因组DNA为模板，进行LAMP扩增反应并获得扩增产物；LAMP反应体系：Mg2+浓度1～2 mM/L，甜菜碱0～1 mM/L，Bst DNA聚合酶192 U～384 U/mL, dNTP浓度0.4～2.4 mM/L，外引物F3和B3浓度均为0.2μM/L，内引物FIP和BIP的浓度均为0.8～2μM/L，DNA模板浓度在20pg～20ng/μL，以超纯水补足25μL；反应程序：扩增温度为60℃～63℃，反应45 min；80℃灭活5 min；所述引物F3、B3、FIP、BIP核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示；向步骤1）扩增产物中加入1000×SYBR Green I荧光染料，若出现绿色，则说明样品中含大肠杆菌；反之，则认为样品中不含大肠杆菌。
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