[发明专利]一种调控枯草芽孢杆菌中目的蛋白表达的方法

摘要

本发明公开了一种调控枯草芽孢杆菌中目的蛋白表达的方法及应用，属于基因工程技术领域。本发明是以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为表达宿主，通过在目的蛋白N端编码基因前添加通过特定方法设计的氨基酸序列，并在质粒中游离表达，使重组枯草芽孢杆菌目的蛋白表达量提高至改造前的397倍，降低至改造前的1.94％。这为枯草芽孢杆菌基因蛋白高效表达和基因工程改造奠定了基础。

主权项

1.一种调控枯草芽孢杆菌中目的蛋白表达的方法，其特征在于，对目的蛋白的N端序列进行改造，将改造后的目的蛋白转入枯草芽孢杆菌中进行表达，所述N端序列元件是目的蛋白N端第1‑15个氨基酸的编码序列，所述改造的方法包括以下任意一种或几种：(1)将目的蛋白N端序列中的丝氨酸(S)、色氨酸(W)、天冬氨酸(D)、半胱氨酸(C)、甘氨酸(G)、亮氨酸(L)、组氨酸(H)、精氨酸(R)列为第一候选位点；当N端第2位非天冬酰胺(N)、赖氨酸(K)、或谷氨酸(E)时，将N端第2位列为第二候选位点，然后将第一候选位点、第二候选位点替换为天冬酰胺、赖氨酸、谷氨酸中的任意一种；替换时，满足下述(a)和(b)：(a)当第一候选位点、第二候选位点的前一个氨基酸或后一个氨基酸是天冬酰胺、赖氨酸、谷氨酸中的任意一种氨基酸时，将该候选位点替换成与其前一个氨基酸或后一个氨基酸相同的氨基酸，但是，若替换后，从该候选位点的前三位至后三位的7个氨基酸中包含了连续4个及以上的由天冬酰胺、赖氨酸、谷氨酸中任意一种或多种组成的氨基酸，则将该候选位点替换为谷氨酰胺(Q)或异亮氨酸(I)；(b)在优先满足(a)的前提下，替换成天冬酰胺的候选位点的数量与替换成赖氨酸的候选位点的数量、替换成谷氨酸的候选位点的数量中的任意一个的差值不超过2；(2)将目的蛋白N端序列中的天冬酰胺、赖氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺所在位点列为第三候选位点，然后将第三候选位点按顺序依次替换成丝氨酸、色氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸。