[发明专利]一种利用大肠杆菌工程菌静息细胞制备10-羟基-2-癸烯酸的方法有效
| 申请号： | 201811126048.1 | 申请日： | 2018-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN109402182B | 公开（公告）日： | 2022-04-05 |
| 发明（设计）人： | 王瑞明;孙淑慧;苏静;汪俊卿;杨晓慧 | 申请（专利权）人： | 齐鲁工业大学 |
| 主分类号： | C12P7/42 | 分类号： | C12P7/42;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 济南竹森知识产权代理事务所(普通合伙) 37270 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 250353 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用大肠杆菌工程菌静息细胞制备10‑羟基‑2‑癸烯酸的方法，步骤如下：(1)构建含有重组质粒pET‑28a‑ydiI的大肠杆菌工程菌；(2)取含有重组质粒pET‑28a‑ydiI的大肠杆菌工程菌，制备诱导细胞；(3)将诱导细胞经转化培养基培养，制得静息细胞，然后向培养基中加入10‑羟基癸酸，制备10‑羟基‑2‑癸烯酸；本发明首次公开了利用基因工程改造的含有硫酯酶的阳性重组大肠杆菌，经过特殊诱导处理后，可以通过静息细胞发酵生产10‑羟基‑2‑癸烯酸，实现了10‑羟基‑2‑癸烯酸的大量生物合成。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 大肠杆菌 工程 菌静息 细胞 制备 10 羟基 癸烯酸 方法 | ||
【主权项】：
1.一种利用大肠杆菌工程菌静息细胞制备10‑羟基‑2‑癸烯酸的方法，其特征在于，步骤如下：(1)构建含有重组质粒pET‑28a‑ydiI的大肠杆菌工程菌；(2)取步骤(1)制得的含有重组质粒pET‑28a‑ydiI的大肠杆菌工程菌，接入含有抗生素的液体培养基中，在35～40℃振荡筛选培养至菌液OD600为0.8～1.2时，降温至14～20℃适应0.5～2小时后，分别加入IPTG使培养基中IPTG浓度为0.5～0.8mM、加入癸烷使培养基中癸烷质量百分比浓度为2～5％、加入吐温80使培养基中吐温80的质量百分比浓度为0.2～0.5％，继续诱导培养4～12小时，分离细胞，制得诱导细胞；(3)将步骤(2)制得的诱导细胞经转化培养基培养，制得静息细胞，然后向培养基中加入10‑羟基癸酸至浓度为4～10g/L，在25～35℃条件下，制得10‑羟基‑2‑癸烯酸；所述转化培养基组份如下，均为质量百分比：甘油0.8～1.2％,葡萄糖0.3～0.5％,抗生素40～60μg/mL，余量为pH7.4的浓度100mM的磷酸钾缓冲液。
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