[发明专利]基于数字LAMP技术检测沙门氏菌的引物及其试剂盒与方法在审
| 申请号： | 201810979598.1 | 申请日： | 2018-08-24 |
| 公开（公告）号： | CN109182467A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 李丽丽;孟赫诚;刘雨琦;石磊;温雯 | 申请（专利权）人： | 暨南大学;华南理工大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/689;C12Q1/10;C12Q1/06;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 王会龙 |
| 地址： | 510632 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于数字LAMP技术检测沙门氏菌的引物及其试剂盒与方法。试剂盒包括:2×ddLAMP Supermix、引物组合、无RNA酶的超纯水、细菌总DNA提取试剂、阴性对照和阳性对照。其检测方法是通过提取待检样品DNA，配置LAMP反应体系，进行微滴化和LAMP反应后，通过检测荧光信号，判断待检样品是否含有沙门氏菌，并测定其含量。本发明具有快速、精准、灵敏、适用性广，无需依赖变温扩增设备，可实现绝对定量等优点，可为肉、蛋、奶等畜禽产品中沙门氏菌的快速检测提供有效分析手段。 | ||
| 搜索关键词： | 沙门氏菌 试剂盒 检测 待检样品 引物 总DNA提取 快速检测 畜禽产品 阳性对照 阴性对照 引物组合 荧光信号 有效分析 超纯水 变温 扩增 微滴 灵敏 细菌 配置 | ||
【主权项】：
1.一种基于数字LAMP技术检测沙门氏菌的引物，包括内引物FIP和BIP，外引物F3和B3，环引物LF和LB，其核苷酸序列分别如下所示：外引物F3：GCGTTACCGATTGATATCTCA外引物B3：CCTCGGTTGCCTATGTATTC内引物FIP：ACGCTTGTTCGCTTAACCTCAACAGACATGCTGCTGC内引物BIP：CTGGCAGTCAGAGGCGATGTATAACGGTTCATATCACCTTACC环引物LF：GTCTTCGTGCTGCGAGT环引物LB：AGGACGTGCTAATCTGCG。
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- 2015-12-01 - 2019-09-03 - C12Q1/6851
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- 幽门螺杆菌阴阳性与克拉霉素耐药性同步检测法-201910447440.4
- 曾旭辉 - 深圳前海大井医疗股份有限公司
- 2019-05-27 - 2019-08-30 - C12Q1/6851
- 本发明公开一种幽门螺杆菌阴阳性与克拉霉素耐药性同步检测法，其包括(1)向样品中加入第一溶液、于80‑100℃下处理2‑10分钟后，进行第一离心得到第一上清液，其中第一溶液包含1‑10重量％的十二烷基硫酸钠，且pH为5.4‑5.6；(2)向第一上清液中加入抑制剂清除剂混合均匀后，进行第二离心得到第二上清液；(3)向第二上清液中依次加入蛋白酶K和第二溶液并于60‑80℃下孵育5‑20分钟，然后加入无水乙醇混匀得到提取液，其中第二溶液包含30‑50重量％盐酸胍和0.1‑1重量％马来酸，且pH为5.8‑6.2；(4)使用离心柱从提取液中纯化得到核酸；(5)检测核酸中的野生型菌含量和突变型菌含量，由此判断样品中幽门螺旋杆菌的阴阳性以及在阳性情况下幽门螺旋杆菌的克拉霉素耐药性。
- 一种基于微球和微柱阵列芯片的乳滴数字PCR定量方法-201610297439.4
- 毛红菊;程祖乐;王琨;夏文薇;金庆辉;赵建龙 - 中国科学院上海微系统与信息技术研究所
- 2016-05-06 - 2019-08-16 - C12Q1/6851
- 本发明涉及一种基于微球和微柱阵列芯片的乳滴数字PCR定量方法，包括：(1)制备微柱阵列芯片；(2)抽取表面修饰链霉亲和素的聚苯乙烯微球，稀释后分步加入到目标磁珠的悬浊液中孵育，富集微球磁珠复合物，重悬；(3)取步骤(2)中的微球磁珠复合物的重悬液，通入到装置中冲洗，通过统计芯片上截留的微球磁珠复合物，得到目标磁珠的个数，从而达到对核酸高灵敏定量的目的。本发明芯片组装简单，成本低；在保留了BEAMing实验高灵敏度特点的同时使得BEAMing技术的目标磁珠计数方法更加方便易行，为核酸的高灵敏检测提供了一个简便、快速的实用工具。
- 探针：反义探针组合物对高特异性DNA或RNA的检测-201280056114.7
- 戴维·A·谢弗 - 健能泰格技术公司
- 2012-09-14 - 2019-08-13 - C12Q1/6851
- 相互作用并标记的多核苷酸探针和反义探针和/或互补的靶探针，为我们提供了用于扩增或检测核酸的组合物及方法。这些组分的竞争性热力相互作用导致显示靶频率的信号变化，并且可以提供促成单碱基识别错误的检查功能。这些探针、反探针组合物能进行实时荧光定量PCR检测，终点检测和微生物的微阵列检测，耐药突变和癌症相关的变异。一些探针、反义探针在两个引物之间作为内部探针，一些作为引物探针。采用两个探针：反义探针系统检测同一模板的不同方面，以辨别或量化一些靶序列。还提供了增强靶扩增和检测特定单碱基变异的系统。探针也可通过引入一个碱基不匹配以增加相差一个碱基的正确与不正确的靶的热力学识别力而修饰。
- 一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法-201910228223.6
- 田庆常;谢恬 - 杭州师范大学
- 2019-03-25 - 2019-08-09 - C12Q1/6851
- 一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法，属于生物技术及医学检测技术领域。其特征在于包含如下操作步骤：1）将胞外囊泡/外泌体与微球孵育结合；2）将结合后的胞外囊泡/外泌体进行数字核酸扩增检测，定量。相对于现有技术，本发明具有如下有益效果:1.可以实现胞外囊泡/外泌体的精确绝对定量；2.实现本发明所需的原料简便易得，操作简单，对设备无特殊要求，成本低廉；3.适用范围广，可以同时提供特异性和非特异性两种定量方式。
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