[发明专利]一种基于毛细管四色荧光电泳检测和多重荧光PCR扩增的高通量棉花品种指纹库构建方法有效
| 申请号： | 201810338628.0 | 申请日： | 2018-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN108707650B | 公开（公告）日： | 2021-07-30 |
| 发明（设计）人： | 吴玉珍;匡猛;周大云;黄龙雨;单峰 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院棉花研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C40B50/06 |
| 代理公司： | 郑州万创知识产权代理有限公司 41135 | 代理人： | 任彬 |
| 地址： | 455000*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于毛细管四色荧光电泳检测和多重荧光PCR扩增的高通量棉花品种指纹库构建方法，该方法包括将分布于棉花A亚组或D亚组全基因组26条染色体上的52对核心引物进行多重荧光PCR组合，提取棉花DNA作为待测样品，使用52对核心引物按照多重荧光PCR组合方式组合得到的5个组合分别对待测样品进行pSSR‑PCR扩增反应，得到PCR扩增产物，将PCR扩增产物进行毛细管四色荧光电泳检测与数据分析。本发明能极大地提高检测通量，检测效率高，该方法尤其适用于大批量棉花品种DNA指纹库的构建。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 毛细管 荧光 电泳 检测 多重 pcr 扩增 通量 棉花 品种 指纹 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于毛细管四色荧光电泳检测和多重荧光PCR扩增的高通量棉花品种指纹库构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将分布于棉花A亚组或D亚组全基因组26条染色体上的52对核心引物进行多重荧光PCR组合，其中每对核心引物标记有荧光染料，所述核心引物的核苷酸序列如下所示：![]()
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所述52对核心引物的多重荧光PCR组合方式如下所示：![]()
(2)提取棉花DNA作为待测样品；(3)使用步骤(1)中52对核心引物按照多重荧光PCR组合方式组合得到的5个组合分别对待测样品进行pSSR‑PCR扩增反应，得到PCR扩增产物；(4)将步骤(3)中的PCR扩增产物进行毛细管四色荧光电泳检测与数据分析。
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