[发明专利]一种新型个体化治疗基因检测方法

摘要

本发明基于环介导等温扩增技术的原理，在其内引物的3’末端设计特异性错配位点，并选择性的引入核酸肽(检测邻近的多个突变(相差不超过10个碱基)、Ins突变、Del突变等多态)，设计了一种专门针对遗传多态检测的新型个体化治疗基因检测技术‑‑‑LAMP‑SNP。该技术不需要特殊检测设备，只需恒温装置即可，如水浴锅等；操作简便，一步反应即可完成；速度快，约30—60min完成检测过程；灵敏度高；特异性强；可扩展性强，可以检测单个或多个或一定通量的遗传多态。该技术的开发将有利于个体化治疗基因检测的推广应用。

主权项

1.一种新型个体化治疗基因检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)提取待测目标DNA；(2)根据所提取的目标DNA，设计目标基因位点的引物对，在某一内引物的3’末端引入突变位点错配位点；所述引物对至少包括4对引物，具体为：内引物FIP、内引物BIP、外引物F3、外引物B3；(3)根据突变位点情况，考虑是否需要增加PNA探针，以增加特异性；以下三种情况需要增加PNA探针：①同时检测邻近的两个或多个突变位点，所述多个突变位点之间相差不超过十个碱基；②Ins突变；③Del突变；(4)在反应体系中对目标DNA进行LAMP‑SNP扩增；所述LAMP‑SNP扩增的反应体系包括溶液1、溶液2及溶液3；溶液1和溶液2如下所示，所述溶液3为封闭液；溶液1的成分和浓度为：Tris‑Hcl(pH8.8)30‑50mMKCl10‑30mMMgSO410‑20mM(NH4)2SO410‑30mMTween200.1‑0.4％Calcein1‑2mMdNTPs1.5‑4mM each溶液2的成分和浓度为：Mix10‑15μLPrimers FIP20‑50pmolPrimersBIP20‑50pmolPrimersF32‑10pmolPrimersB32‑10pmolBst DNA polymerase0.5‑2μL/8UAdd distilled waterto20‑40μL/tube(5)采用荧光目视法判断LAMP‑SNP结果。