[发明专利]一种新型个体化治疗基因检测方法在审
| 申请号： | 201810282051.6 | 申请日： | 2018-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN108504721A | 公开（公告）日： | 2018-09-07 |
| 发明（设计）人： | 蒋健晖;郭成贤;申全广 | 申请（专利权）人： | 湖南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 北京天奇智新知识产权代理有限公司 11340 | 代理人： | 刘佳芳 |
| 地址： | 410012 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 个体化治疗 突变 检测 基因检测 遗传多态 环介导等温扩增技术 基因检测技术 恒温装置 检测设备 可扩展性 末端设计 特异性强 一步反应 灵敏度 水浴锅 核酸 错配 多态 碱基 通量 位点 引物 邻近 引入 开发 | ||
1.一种新型个体化治疗基因检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)提取待测目标DNA；
(2)根据所提取的目标DNA，设计目标基因位点的引物对，在某一内引物的3’末端引入突变位点错配位点；所述引物对至少包括4对引物，具体为：内引物FIP、内引物BIP、外引物F3、外引物B3；
(3)根据突变位点情况，考虑是否需要增加PNA探针，以增加特异性；以下三种情况需要增加PNA探针：①同时检测邻近的两个或多个突变位点，所述多个突变位点之间相差不超过十个碱基；②Ins突变；③Del突变；
(4)在反应体系中对目标DNA进行LAMP-SNP扩增；所述LAMP-SNP扩增的反应体系包括溶液1、溶液2及溶液3；溶液1和溶液2如下所示，所述溶液3为封闭液；
溶液1的成分和浓度为：
Tris-Hcl(pH8.8) 30-50mM KCl 10-30mM MgSO4 10-20mM (NH4)2SO4 10-30mM Tween20 0.1-0.4％ Calcein 1-2mM dNTPs 1.5-4mM each
溶液2的成分和浓度为：
Mix 10-15μL Primers FIP 20-50pmol PrimersBIP 20-50pmol PrimersF3 2-10pmol PrimersB3 2-10pmol Bst DNA polymerase 0.5-2μL/8U Add distilled water to20-40μL/tube
(5)采用荧光目视法判断LAMP-SNP结果。
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