[发明专利]一种新型个体化治疗基因检测方法

说明书

本发明基于环介导等温扩增技术的原理，在其内引物的3’末端设计特异性错配位点，并选择性的引入核酸肽(检测邻近的多个突变(相差不超过10个碱基)、Ins突变、Del突变等多态)，设计了一种专门针对遗传多态检测的新型个体化治疗基因检测技术‑‑‑LAMP‑SNP。该技术不需要特殊检测设备，只需恒温装置即可，如水浴锅等；操作简便，一步反应即可完成；速度快，约30—60min完成检测过程；灵敏度高；特异性强；可扩展性强，可以检测单个或多个或一定通量的遗传多态。该技术的开发将有利于个体化治疗基因检测的推广应用。

技术领域

本发明属于遗传多态检测领域，具有涉及一种新型个体化治疗基因检测方法。

背景技术

有大量的研究证实了遗传多态性是影响药物反应个体差异的重要因素。阐明遗传因素对药物反应个体差异影响的学科即药物基因组学。药物基因组学是生命科学中发展迅速和备受关注的热点研究领域，是精准医学重要的组成部分，是实现个体化治疗与精准用药的理论支柱。迄今为止，美国FDA公布了140余种药物建议通过遗传信息指导其合理使用，美国临床药物基因组学应用委员会(Clinical Pharmacogenetics ImplementationConsortium，CPIC)也制定了33个药物的药物基因组学应用指南，PharmGKB提供了3300多个临床注释。美国多家医疗机构已将个体化治疗基因检测应用于临床实践，如梅奥医学中心(Mayo clinic)、美国圣裘德儿童研究医院(St.Jude Children’s Research Hospital)、范德比尔特大学医学中心(Vanderbilt University Medical Center)、西奈山医学中心和佛罗里达大学Shands医院等。我国药物基因组学与个体化治疗紧跟国际步伐，2015年国家卫生计生委发布了《药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南》和《肿瘤个体化治疗检测技术指南》，2015年我省也发布了《湖南省促进基因检测技术应用若干政策》的通知，2016年人民卫生出版社出版了国内首部药物基因组学应用专著《药物基因组学与个体化治疗用药决策》。我国许多的大型三甲医院，如北京协和医院、北京大学第一医院、首都医科大学附属北京朝阳医院、四川大学华西医院、及湘雅三家附属医院等，也在临床开展基因检测指导药物个体化治疗的检测项目。基因指导药物个体化治疗主要体现在两个方面：①预测药物疗效，选择合适的药物和/或调整给药剂量；②预测药物毒性，选择合适的药物和/或调整给药剂量。

随着基因导向的个体化治疗在临床的推广应用，对用药相关基因多态性检测越来越受到临床医生的关注。开发稳定、经济、快捷、方便的药物相关基因检测技术及试剂盒服务于临床和患者，显得越来越重要。目前国内外均开发了较多的个性化用药基因检测试剂盒，主要基于的是实时荧光定量PCR技术、核酸探针技术、基因芯片技术。实时荧光定量PCR法检测快速准确，但是需要昂贵的荧光检测仪和荧光分子标记探针，通常在普通实验室不能得到广泛开展；核酸探针检测技术的优点是特异性好，缺点是灵敏度低，检测每种SNP都需要制备相应的探针，且需要昂贵的分析仪，所以很难在个体化治疗基因检测领域得到应用；基因芯片技术通量较高，但是其存在检测费用昂贵、设备要求高等问题，也难以在普通实验室应用。因此，尽管目前已有可用于个体化治疗基因检测的试剂盒，但仍难以适应临床的实际需求，尤其是普通的实验室。

基于目前市场上的个体化治疗基因检测商品试剂盒难以在临床实际中广泛推广应用，尤其是在中小型医院。因此，开发一种理想的个体化治疗基因检测技术(操作简单、快速；低成本；结果准确；结果数据分析简单；可扩展性强，可以用来检测不同类型的分子)显得势在必行。

遗传多态是导致临床药物反应个体差异的主要因素之一。已有多种药物，如华法林、伊立替康、他克莫司等，通过整合遗传多态构建了个体化治疗预测模型及临床决策支持系统。然而由于缺乏理想的个体化治疗基因检测技术，使得目前个体化治疗基因检测尚难以广泛在临床推广应用。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，开发一种新型个体化治疗基因检测技术LAMP-SNP。