[发明专利]一种检测血液中儿茶酚-氧-甲基转移酶活性的方法在审
| 申请号： | 201810269583.6 | 申请日： | 2018-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN108486220A | 公开（公告）日： | 2018-09-04 |
| 发明（设计）人： | 高明宇 | 申请（专利权）人： | 沈阳北创医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/48 | 分类号： | C12Q1/48 |
| 代理公司： | 沈阳圣群专利事务所(普通合伙) 21221 | 代理人： | 王玉信 |
| 地址： | 110000 辽宁省沈阳*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种检测血液中儿茶酚‑氧‑甲基转移酶活性的方法，属于生物医药技术领域。本发明借助高效液相色谱与荧光检测联用仪在抗生物基质干扰和检测灵敏度上的优势，选择化学稳定性好的3‑苯并噻唑‑7,8‑二羟基香豆素（3‑BTD）为COMT酶的荧光底物，同时结合高效液相色谱‑荧光检测技术，开发了一种高效、高灵敏且可定量分析血液中微量COMT活性的测定方法。本发明所采用的荧光探针底物可经化学合成获得，合成工艺简单易行且性质稳定。本方法具有灵敏度高、准确度高、抗生物基质干扰能力强、重复性好等优点，不仅可用于血中COMT酶活的检测，还可用于各种哺乳动物来源的细胞或组织制备物中COMT酶活的定量测定，以及COMT诱导剂/激活剂的筛选与评价。 | ||
| 搜索关键词： | 甲基转移酶活性 高效液相色谱 生物基质 儿茶酚 种检测 血液 可用 酶活 哺乳动物来源 生物医药技术 荧光检测技术 化学稳定性 检测灵敏度 定量分析 苯并噻唑 定量测定 合成工艺 化学合成 性质稳定 荧光底物 荧光检测 荧光探针 准确度 二羟基 激活剂 联用仪 灵敏度 能力强 诱导剂 制备物 底物 香豆 灵敏 筛选 细胞 检测 开发 | ||
【主权项】：
1.一种检测血液中儿茶酚‑氧‑甲基转移酶活性的方法，其特征在于该方法采用高效液相色谱与荧光检测联用法对目标酶进行分析，其检测步骤如下：（1）样品前处理：适量抗凝血加等量生理盐水，混匀，2000 r/min 离心5min，去上清; 取适量红细胞加9体积去离子水，震荡混匀，3000 r/min 离心备用；（2）高效液相色谱‑荧光检测分析条件的确立：检测系统包括高效液相系统与荧光检测器两部分；分析条件如下：分析柱为Hedera C18 反相色谱柱（150.0 mm×2.1 mm, 3 μm），柱温箱温度设为40°C；流动相A为乙腈，B为水（含0.2%甲酸），流速为0.4 ml/min，梯度洗脱条件为：0‑10.0 min, 90% B‑5% B; 10.0‑13.0 min, 5% B; 13.0‑ 16.0 min, 平衡到90% B，荧光检测条件为：激发光波长390 nm，发射波长为520 nm；（3）标准液配置与标准曲线绘制：以3‑苯并噻唑‑7‑羟基‑8‑甲氧基香豆素（3‑BTMD）为标准品，精确配置系列浓度，以其荧光值对标准品浓度作图，计算回归方程y=a*x+b，获得标准曲线；（4）样品中COMT活性测定以3‑苯并噻唑‑7,8‑二羟基香豆素（3‑BTD）为COMT甲基化反应探针底物，COMT酶反应在pH 7.4的50 mM Tris‑HCl缓冲液中进行，含有待测样品10 μL 以及5 mM氯化镁（MgCl2），2 mM 二硫苏糖醇（DTT），0.2 mM S‑腺苷甲硫氨酸（SAM），总反应体系体积为0.2 mL，37°C条件下预孵3 min后，用SAM起始反应，孵育10 min后，通过加入200 μl乙腈终止反应，充分涡旋后，在4°C下20000×g 条件下离心20分钟，上清液进行高效液相色谱‑荧光检测分析, 将待测样本的荧光值代入标准曲线换算COMT酶的活性。
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- 菅晓勇;王天泽 - 北京中科唯新生物医学研究所有限公司
- 2016-03-10 - 2019-01-25 - C12Q1/48
- 本发明提供一种检测儿茶酚‑O‑甲基转移酶酶活力的组合产品，该产品含有S‑腺苷‑L‑甲硫氨酸或生成S‑腺苷‑L‑甲硫氨酸的酶反应系统，所述生成S‑腺苷‑L‑甲硫氨酸的酶反应系统包括三磷酸腺苷，甲硫氨酸和S‑腺苷甲硫氨酸合成酶；甲基受体；S‑腺苷‑L‑同型半胱氨酸水解酶。优选地，所述组合产品为试剂盒形式，其中各包含成分为各自独立存在的试剂状态。采用该组合产品可以在半自动或全自动的分析检测设备上使用，而且检测灵敏度高，特异性高，操作简便，因而可以得到切实的推广使用。
- 一种稳定的酶法血清镁离子检测试剂盒-201610126969.2
- 王爰;李建营;甘宜梧 - 王爰
- 2016-03-07 - 2019-01-04 - C12Q1/48
- 本发明提供了一种稳定的酶法血清镁离子检测试剂盒，通过使用丙三醇、D‑吡喃葡萄糖、聚乙二醇和葡聚糖物质，通过不同比例的组合形成一种具有较强隔离保护作用的膜物质，达到了隔离保护酶的目的，当试剂R1和R2混合后，被隔离的酶被释放出来，进而和底物发生反应，达到了让试剂长期储存的目的，解决了酶在试剂中不稳定的问题。
- 一种1;5-脱水山梨醇的检测试剂盒及其检测方法-201711389574.2
- 张玲;李民友;梁灿;蔺涛 - 广州市进德生物科技有限公司
- 2017-12-18 - 2019-01-04 - C12Q1/48
- 本发明公开了一种1,5‑脱水山梨醇的检测试剂盒及其检测方法。本发明的检测试剂盒能够使样本在反应循环过程中达到能量供应，消除样本中葡萄糖和试验副产物葡萄糖6‑磷酸、丙酮酸干扰，避免因产物的积累造成的逆反应。在消除葡萄糖及副产物积累后，使1,5‑AG转化成1,5‑脱水‑果糖与过氧化氢，过氧化氢与发光底物反应形成一种持续稳定的化学发光信号。与传统的酶比色法相比，本发明的检测试剂盒具有灵敏度高、准确性好、特异性高、抗干扰能力强、稳定性好等优点。
- 基于银纳米簇荧光探针的T4多聚核苷酸激酶活性检测方法-201810709560.2
- 李金龙;张永臣;刘冰雪;许传军;王礼学 - 南京市第二医院
- 2018-07-02 - 2018-11-16 - C12Q1/48
- 本发明公开了一种基于银纳米簇荧光探针的T4多聚核苷酸激酶活性检测方法，通过制备无标记的、“turn‑off”型荧光探针，并将其用于检测T4 PNK的活性。具体为准备银纳米簇模板化的DNA链为S1(DNA S1)，含有[3′‑G4(TG4)2TG3]序列的DNA链为S2(DNA S2)，将两条链杂交，在富含G序列的作用下，银纳米簇可产生强烈的红色荧光，T4 PNK能使双链DNA的5‑羟基末端磷酸化，从而产生5‑磷酸基末端，其可迅速被λ核酸外切酶识别并降解，导致两条DNA链分离，荧光信号迅速减弱，产生与T4 PNK浓度成反比的信号。因此，应用本发明可精确检测T4 PNK活性，根据DNA‑AgNCs荧光信号强度，该方法的检测灵敏度可达到0.01U/mL。
- 一种端粒酶检测方法、检测核酸探针分子及检测试剂盒-201810614681.9
- 欧小文;夏帆;娄筱叮 - 华中科技大学
- 2018-06-14 - 2018-11-13 - C12Q1/48
- 本发明公开了一种端粒酶检测方法、检测核酸探针分子及检测试剂盒，属于生物检测领域。该检测方法为将带正电的聚集诱导发光化合物、核酸分子探针、端粒酶引物片段、氧化石墨烯、dNTPs以及RNase抑制剂加入到缓冲液中，加入待测液后，所述端粒酶引物片段在具有活性端粒酶的作用下，扩增得到端粒酶重复片段；该端粒酶重复片段与核酸分子探针杂交，形成双链DNA；该双链DNA吸附带正电的聚集诱导发光化合物，使带正电的聚集诱导发光化合物发出荧光信号，根据荧光强度得到端粒酶的活性。所述核酸分子探针的序列如SEQ ID No：4所示。检测端粒酶的试剂盒包含该探针分子。本发明所用探针无修饰，聚集诱导发光化合物信号灵敏度高，实际应用性强。
- 谷子酶活性的测定方法-201810451879.X
- 郭世华;李强;李涛;白玉婷;任芹勇;高媛;李星聪;王参观 - 内蒙古农业大学
- 2018-05-12 - 2018-11-06 - C12Q1/48
- 本发明公开了一种谷子酶活性的测定方法，涉及农业生物技术领域。本发明方法包括：将谷子开花期第12天设为取样第1天，依次在取样第3天、第5天、第10天、第15天、第20天、第25天及第30天分别采集幼穗作为待测样品；利用液氮研磨所述待测样品，称取预设重量的待测样品，利用试剂盒提纯待测酶；利用紫外分光光度计测定所述待测酶的酶活性，得到所述谷子的酶活性数据。本发明方法测定酶活性结果准确、操作简单；可为粳糯谷子胚乳形成期转录组序列分析、筛选淀粉合成通路粳糯谷子差异表达基因提供材料依据。
- 诊断伴随过度细胞死亡的疾病的方法以及用于其实施的试剂盒-201780010157.4
- A·A·梅尔尼科夫 - 生物标记-RU有限责任公司
- 2017-02-03 - 2018-10-23 - C12Q1/48
- 本发明涉及医学，具体涉及实验室诊断，并涉及伴随细胞死亡增加的疾病的诊断和用于其实施的试剂盒。从个体获得血浆样品，然后进行血浆中核酸的等温扩增。然后从反应混合物中纯化核酸，并通过实时聚合酶链式反应方法进行核酸定量分析。在测试中确定系数К，如(I)所示。其中，Ct为聚合酶链式反应阈值循环的值。然后将系数К与参考值进行比较，当系数К值小于参考值，则诊断为伴随细胞死亡增加的疾病。还提供了用于执行伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法的试剂盒。本发明使得可以以高灵敏度在疾病的任何阶段(包括不存在临床症状的早期阶段)进行伴随细胞死亡增加的疾病的微创诊断。К＝C1或
或
或
其中
- 用于具有抗流感活性的化合物的测定-201780009842.5
- 石天来 - 豪夫迈·罗氏有限公司
- 2017-02-03 - 2018-09-28 - C12Q1/48
- 本发明提供一种鉴定能够抑制流感病毒核糖核蛋白(RNP)复合物中包含的RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)的至少一种活性的物质的方法，该方法包括或由以下组成：(a)提供包含所述RNP复合物的纯化的流感病毒的含水悬浮液；(b)向步骤(a)的所述悬浮液中加入(i)非离子或两性离子表面活性剂；和(ii)还原剂；(c)孵育步骤(b)中获得的混合物以获得流感病毒裂解物；(d)在允许测试物质与所述RNP复合物中包含的所述RdRp相互作用的条件下使步骤(c)中获得的流感病毒裂解物与所述测试物质接触，所述RNP复合物存在于所述流感病毒裂解物中；和(e)确定所述测试物质是否抑制所述RdRp的所述至少一种活性。
- 专利分类
