[发明专利]ATP硫酸化酶的生物素标记方法有效
| 申请号： | 201510417032.6 | 申请日： | 2015-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN105018569B | 公开（公告）日： | 2019-05-31 |
| 发明（设计）人： | 高静;蔡亦梅;徐潇;吴超;张睿;王者馥;王绪敏;殷金龙;任鲁风 | 申请（专利权）人： | 北京中科紫鑫科技有限责任公司 |
| 主分类号： | C12Q1/48 | 分类号： | C12Q1/48 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 101111 北京市大兴区经济技术开发区科创六街*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，具体涉及ATP硫酸化酶的生物素标记方法。步骤包括透析ATP硫酸化酶，活化生物素，透析生物素化的ATP硫酸化酶，纯化，测定蛋白和冷藏。在测序反应中，生物素化的ATP硫酸化酶可与焦磷酸酶和荧光素酶协同作用，进行通量高、读长大的测序反应。 | ||
| 搜索关键词： | atp 硫酸 生物素 标记 方法 | ||
【主权项】：
1.一种ATP硫酸化酶的生物素标记方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）使用pH值为8.0的PBS缓冲液溶解ATP硫酸化酶；（2）使用pH值为8.0的PBS缓冲液对ATP硫酸化酶进行透析；（3）活化生物素：将生物素、EDC和NHS加入二甲基甲酰胺中，生物素、EDC和NHS的摩尔比为4:5:4，二甲基甲酰胺的纯度为分析纯以上；（4）平衡生物素至10℃以下；（5）将活化的生物素溶于二甲基甲酰胺和四氢呋喃混合溶剂中，加入ATP硫酸化酶，按照活化的生物素与ATP硫酸化酶摩尔比（22‑25）:1的比例混合，搅拌，得到混合溶液；（6）使用pH值为8.0的PBS缓冲液对混合溶液进行透析，去除杂质和游离生物素；（7）采用superdex 200进行分子排阻；（8）使用280nm的吸光度测定蛋白含量；（9）加入保护剂，冷藏保存至‑80℃—‑16℃；所述溶解ATP硫酸化酶，使ATP硫酸化酶浓度为1.5‑2mg/ml；所述搅拌温度为4℃，持续5小时以上；所述透析过程，PBS缓冲液体积为混合溶液的10倍以上，PBS缓冲液更换一次以上；所述保护剂含有PBS缓冲液；还含有甘氨酸、组氨酸、甘露醇、DTT、EDTA、叠氮钠和聚乙二醇中的一种或几种；制备得到的生物素化ATP硫酸化酶适合应用于焦磷酸测序反应中，在测序反应中，与焦磷酸酶和ATP硫化酶协同作用，进行通量高、读长大的测序反应。
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- 本发明公开了一种1,5‑脱水山梨醇的检测试剂盒及其检测方法。本发明的检测试剂盒能够使样本在反应循环过程中达到能量供应，消除样本中葡萄糖和试验副产物葡萄糖6‑磷酸、丙酮酸干扰，避免因产物的积累造成的逆反应。在消除葡萄糖及副产物积累后，使1,5‑AG转化成1,5‑脱水‑果糖与过氧化氢，过氧化氢与发光底物反应形成一种持续稳定的化学发光信号。与传统的酶比色法相比，本发明的检测试剂盒具有灵敏度高、准确性好、特异性高、抗干扰能力强、稳定性好等优点。
- 基于银纳米簇荧光探针的T4多聚核苷酸激酶活性检测方法-201810709560.2
- 李金龙;张永臣;刘冰雪;许传军;王礼学 - 南京市第二医院
- 2018-07-02 - 2018-11-16 - C12Q1/48
- 本发明公开了一种基于银纳米簇荧光探针的T4多聚核苷酸激酶活性检测方法，通过制备无标记的、“turn‑off”型荧光探针，并将其用于检测T4 PNK的活性。具体为准备银纳米簇模板化的DNA链为S1(DNA S1)，含有[3′‑G4(TG4)2TG3]序列的DNA链为S2(DNA S2)，将两条链杂交，在富含G序列的作用下，银纳米簇可产生强烈的红色荧光，T4 PNK能使双链DNA的5‑羟基末端磷酸化，从而产生5‑磷酸基末端，其可迅速被λ核酸外切酶识别并降解，导致两条DNA链分离，荧光信号迅速减弱，产生与T4 PNK浓度成反比的信号。因此，应用本发明可精确检测T4 PNK活性，根据DNA‑AgNCs荧光信号强度，该方法的检测灵敏度可达到0.01U/mL。
- 一种端粒酶检测方法、检测核酸探针分子及检测试剂盒-201810614681.9
- 欧小文;夏帆;娄筱叮 - 华中科技大学
- 2018-06-14 - 2018-11-13 - C12Q1/48
- 本发明公开了一种端粒酶检测方法、检测核酸探针分子及检测试剂盒，属于生物检测领域。该检测方法为将带正电的聚集诱导发光化合物、核酸分子探针、端粒酶引物片段、氧化石墨烯、dNTPs以及RNase抑制剂加入到缓冲液中，加入待测液后，所述端粒酶引物片段在具有活性端粒酶的作用下，扩增得到端粒酶重复片段；该端粒酶重复片段与核酸分子探针杂交，形成双链DNA；该双链DNA吸附带正电的聚集诱导发光化合物，使带正电的聚集诱导发光化合物发出荧光信号，根据荧光强度得到端粒酶的活性。所述核酸分子探针的序列如SEQ ID No：4所示。检测端粒酶的试剂盒包含该探针分子。本发明所用探针无修饰，聚集诱导发光化合物信号灵敏度高，实际应用性强。
- 谷子酶活性的测定方法-201810451879.X
- 郭世华;李强;李涛;白玉婷;任芹勇;高媛;李星聪;王参观 - 内蒙古农业大学
- 2018-05-12 - 2018-11-06 - C12Q1/48
- 本发明公开了一种谷子酶活性的测定方法，涉及农业生物技术领域。本发明方法包括：将谷子开花期第12天设为取样第1天，依次在取样第3天、第5天、第10天、第15天、第20天、第25天及第30天分别采集幼穗作为待测样品；利用液氮研磨所述待测样品，称取预设重量的待测样品，利用试剂盒提纯待测酶；利用紫外分光光度计测定所述待测酶的酶活性，得到所述谷子的酶活性数据。本发明方法测定酶活性结果准确、操作简单；可为粳糯谷子胚乳形成期转录组序列分析、筛选淀粉合成通路粳糯谷子差异表达基因提供材料依据。
- 诊断伴随过度细胞死亡的疾病的方法以及用于其实施的试剂盒-201780010157.4
- A·A·梅尔尼科夫 - 生物标记-RU有限责任公司
- 2017-02-03 - 2018-10-23 - C12Q1/48
- 本发明涉及医学，具体涉及实验室诊断，并涉及伴随细胞死亡增加的疾病的诊断和用于其实施的试剂盒。从个体获得血浆样品，然后进行血浆中核酸的等温扩增。然后从反应混合物中纯化核酸，并通过实时聚合酶链式反应方法进行核酸定量分析。在测试中确定系数К，如(I)所示。其中，Ct为聚合酶链式反应阈值循环的值。然后将系数К与参考值进行比较，当系数К值小于参考值，则诊断为伴随细胞死亡增加的疾病。还提供了用于执行伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法的试剂盒。本发明使得可以以高灵敏度在疾病的任何阶段(包括不存在临床症状的早期阶段)进行伴随细胞死亡增加的疾病的微创诊断。К＝C1或
或
或
其中
- 用于具有抗流感活性的化合物的测定-201780009842.5
- 石天来 - 豪夫迈·罗氏有限公司
- 2017-02-03 - 2018-09-28 - C12Q1/48
- 本发明提供一种鉴定能够抑制流感病毒核糖核蛋白(RNP)复合物中包含的RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)的至少一种活性的物质的方法，该方法包括或由以下组成：(a)提供包含所述RNP复合物的纯化的流感病毒的含水悬浮液；(b)向步骤(a)的所述悬浮液中加入(i)非离子或两性离子表面活性剂；和(ii)还原剂；(c)孵育步骤(b)中获得的混合物以获得流感病毒裂解物；(d)在允许测试物质与所述RNP复合物中包含的所述RdRp相互作用的条件下使步骤(c)中获得的流感病毒裂解物与所述测试物质接触，所述RNP复合物存在于所述流感病毒裂解物中；和(e)确定所述测试物质是否抑制所述RdRp的所述至少一种活性。
- 专利分类
