[发明专利]基于核酸染料TOTO-1对单链G序列荧光增强的检测端粒酶活性的方法有效
| 申请号： | 201810227750.0 | 申请日： | 2018-03-20 |
| 公开（公告）号： | CN108486222B | 公开（公告）日： | 2021-08-10 |
| 发明（设计）人： | 卫伟;杨海堂;刘松琴 | 申请（专利权）人： | 东南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/682 | 分类号： | C12Q1/682 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 王艳 |
| 地址： | 211102 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开一种基于核酸染料TOTO‑1对单链G序列荧光增强的检测端粒酶活性的方法。本方法步骤如下：1）细胞的培养以及端粒酶的提取得到裂解后的细胞溶液；2）将裂解后的细胞溶液加入端粒酶扩增缓冲溶液，对端粒酶引物进行扩增，得到重复的富G序列的产物溶液；3）加入TS primer的互补序列，杂交后，再加ExoⅢ酶切除双链，最后加TOTO‑1，孵育，检测荧光光谱。本发明利用了TOTO对含G碱基DNA链的识别作用来检测端粒酶，简化了检测方法，避免了标记DNA探针而导致检测成本高、操作烦琐，重现性差的缺陷。本发明具有成本低、快速、简便、灵敏度高的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 核酸 染料 toto 序列 荧光 增强 检测 端粒 活性 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于核酸染料TOTO‑1对单链G序列荧光增强的检测端粒酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)细胞的培养以及端粒酶的提取获得裂解后的细胞溶液；2)将裂解后的细胞溶液加入含有TS primer的端粒酶缓冲溶液，对TS primer进行扩增，得到重复的富G序列的产物溶液；3)在产物溶液中加入TS primer的互补序列和杂交缓冲液进行杂交得到杂交好的产物；4)杂交好的产物中再加入ExoⅢ酶切除双链，最后加入核酸染料TOTO‑1孵育，检测荧光光谱。
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