[发明专利]基于核酸染料TOTO-1对单链G序列荧光增强的检测端粒酶活性的方法

权利要求书

1.一种基于核酸染料TOTO-1对单链G序列荧光增强的检测端粒酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）细胞的培养以及端粒酶的提取获得裂解后的细胞溶液；

2）将裂解后的细胞溶液加入含有TS primer的端粒酶缓冲溶液，对TS primer进行扩增，得到重复的富G序列的产物溶液；

3）在产物溶液中加入TS primer的互补序列和杂交缓冲液进行杂交得到杂交好的产物；

4）杂交好的产物中再加入ExoⅢ酶切除双链，最后加入核酸染料TOTO-1孵育，检测荧光光谱；

所述步骤2）TS primer的序列如SEQ ID NO：1所示，扩增端粒酶时TS primer的浓度为1～6 μM；所述步骤4）中的ExoⅢ 酶的终浓度为0.5～3U/μL，所述步骤4）的核酸染料TOTO-1浓度为25~300nM。

2.根据权利要求1所述的一种基于核酸染料TOTO-1对单链G序列荧光增强的检测端粒酶活性的方法，其特征在于，所述步骤1）细胞数目为2~4000个。

3.根据权利要求1所述的一种基于核酸染料TOTO-1对单链G序列荧光增强的检测端粒酶活性的方法，其特征在于，所述步骤2）具体步骤如下：用端粒酶缓冲溶液将裂解后的细胞溶液配置成不同的浓度，在含有dNTPs、端粒酶扩增引物的端粒酶缓冲溶液中滴加不同浓度的裂解后的细胞溶液对其引物进行扩增延伸，37℃反应1～2 h。

4.根据权利要求3所述的一种基于核酸染料TOTO-1对单链G序列荧光增强的检测端粒酶活性的方法，其特征在于，所述步骤2）端粒酶缓冲溶液为含有MgCl₂、EGTA、Tween 20的Tris-HCl，所述MgCl₂初始浓度为1～5 mM，EGTA初始浓度为0.05~5 mM，Tween 20初始体积百分比浓度为0.005%～1%，dNTPs初始浓度为0.5~2mM。

5.根据权利要求1所述的一种核酸染料TOTO-1对单链G序列荧光增强的检测端粒酶活性的方法，其特征在于，所述步骤3）的杂交缓冲溶液为含有NaCl、EDTA的Tris-HCl，所述NaCl初始浓度为50 mM，EDTA的初始浓度0.1～1 mM。

6.根据权利要求1所述的一种基于核酸染料TOTO-1对单链G序列荧光增强检测端粒酶的方法，其特征在于，所述步骤3）的TS primer的互补序列终浓度为0.5～1μM。

7.根据权利要求6所述的一种基于核酸染料TOTO-1对单链G序列荧光增强检测端粒酶的方法，其特征在于，所述步骤4）的具体步骤如下：取杂交好的产物加ExoⅢ酶，37℃反应1~2小时，取TOTO-1加入到上述反应物中，对其溶液进行记录和荧光光谱检测。