[发明专利]一种高通量简化基因组测序文库的构建方法

摘要

本发明公开了一种高通量简化基因组测序文库的构建方法，包括如下步骤：将基因组DNA样本用限制性内切酶分别对不同的基因组DNA样本进行酶切，能够获得多组不同类型基因组DNA样本的DNA片段，并将不同的DNA片段分别与含有不同条形码序列的甲基化接头相连接，从而获取不同类型的连接产物，将连接产物添加扩增引物，进行PCR扩增，获得含有不同条形码序列的扩增产物，将扩增片段再次置于琼脂糖凝胶中，然后经琼脂糖凝胶电泳后回收DNA片段作为测序文库，采用芯片分析系统进行最终的质量检测和测序。该方法有效解决了远交群体物种高通量基因分型个体间片段变异大、测序深度低以及基因分型准确性低的问题。

主权项

1.一种高通量简化基因组测序文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：选择不同类型的基因组DNA样本，并将基因组DNA样本在10‑20摄氏度的无菌环境中进行保存，并用限制性内切酶分别对不同的基因组DNA样本进行酶切，且在酶切时，需将不同样本分时段进行酶切，从而能避免不同样本发生接触，影响基因组DNA样本的原始形态；S2：完成酶切后，能够获得多组不同类型基因组DNA样本的DNA片段，并将不同的DNA片段分别进行储存，且储存环境为2‑8摄氏度，并向DNA片段内添加lamda噬菌体基因组DNA，能够将DNA片段末端进行修复，然后再次向其中添加碱基，并将其储存12‑24h，然后备用；S3：将S2中储存后的不同类型的DNA片段取出，并在放置在15‑25摄氏度的反应器皿内，并将不同的DNA片段分别与含有不同条形码序列的甲基化接头相连接，从而获取不同类型的连接产物，然后将连接产物置于纯化仪器内，并在5‑15摄氏度的条件下利用水解酶对连接产物进行纯化20‑40min；S4：将S3中纯化后的连接产物添加扩增引物，进行PCR扩增，获得含有不同条形码序列的扩增产物，然后确定每组扩增产物的量，进行琼脂糖凝胶分离后，再次进行纯化，获得特定长度的扩增片段；S5：将S4中扩增后的扩增片段再次置于琼脂糖凝胶中，然后经琼脂糖凝胶电泳后回收DNA片段作为测序文库，采用芯片分析系统进行最终的质量检测和测序。