[发明专利]蔬菜中肠出血性大肠埃希氏菌的PCR检测方法在审
| 申请号： | 201711384960.2 | 申请日： | 2017-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN108179204A | 公开（公告）日： | 2018-06-19 |
| 发明（设计）人： | 罗雁非;聂丹丹;丁旭;王准;肖建光;曲辉;吴连鹏;孙玉;彭勃 | 申请（专利权）人： | 吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/19 |
| 代理公司： | 长春市东师专利事务所 22202 | 代理人： | 张铁生 |
| 地址： | 130062 吉林*** | 国省代码： | 吉林;22 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种蔬菜中肠出血性大肠埃希氏菌PCR检测方法，尤其涉及一种优化的微滴数字PCR检测反应体系。所述的微滴数字PCR检测方法包括以下步骤：a.制备样品和增菌培养；b.提取细菌模板DNA；c.以提取的DNA为模板，加入上述的引物和带荧光染料的探针以及酶反应液进行实时荧光PCR反应，所述的反应结束后，检测所有微滴的荧光信号值并设定阈值，根据荧光信号的阈值确定微滴是否包裹模板DNA，高于阈值的微滴包裹模板DNA，为阳性微滴，低于阈值的微滴不包裹模板DNA为阴性微滴，本发明提供的检测方法工作流程简单，又兼具实时荧光定量PCR方法的优点，可实现核酸绝对定量分析，并且又具有高通量样品处理能力，实用性强。 | ||
| 搜索关键词： | 微滴 模板DNA 出血性大肠埃希氏菌 荧光信号 数字PCR 检测 实时荧光定量PCR 实时荧光PCR 高通量样品 定量分析 工作流程 检测反应 酶反应液 细菌模板 荧光染料 增菌培养 阈值确定 核酸 探针 阴性 引物 制备 优化 | ||
【主权项】：
1.微滴数字PCR检测肠出血性大肠埃希氏菌O157:H7的引物和探针，碱基序列分别为：rfbE基因上游引物： CTGTAAGTAATGGAACGGTTG；rfbE基因下游引物： GTCAGTGTTGGAACAATAACT；rfbE基因探针： ATCTCCTTCCGATATACCTAACGC，其特征在于：所述的rfbE基因探针带荧光染料，5’端为FAM标记，3’端为TAMRA标记。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心，未经吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201711384960.2/，转载请声明来源钻瓜专利网。
