[发明专利]应用模拟流动床分离纯化FMD灭活病毒抗原的方法有效
| 申请号： | 201711208043.9 | 申请日： | 2017-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN109836479B | 公开（公告）日： | 2021-01-12 |
| 发明（设计）人： | 姬明放;马贵军;张震;杜祥月 | 申请（专利权）人： | 申联生物医药（上海）股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/09 | 分类号： | C07K14/09;C07K1/16 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 庄文莉 |
| 地址： | 200241 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种应用模拟流动床分离纯化FMD灭活病毒抗原的方法，包括以下步骤：用平衡缓冲溶液平衡模拟流动床的色谱层析柱；将FMD灭活病毒抗原样品上样至模拟流动床色谱层析柱中，上样过程中可同时对色谱层析柱进行抗原样品杂质清洗及样品解吸洗脱，色谱填料的清洗再生及平衡液平衡，在连续解吸洗脱过程中收集纯化后的样品。本发明首次将模拟流动床应用于FMD灭活病毒抗原的分离纯化，可实现连续饱和上样分离操作，大大提高了上样量；且通过多个单体柱连续分离纯化，连续化程度高，大大缩短了分离纯化时间，提高了制备效率，降低了运行成本。且本发明特定的选择刚性填料，使其填料载量即耐压性大幅提高，减少了色谱填料的使用量，延长了模拟流动床中色谱柱的使用寿命。 | ||
| 搜索关键词： | 应用 模拟 流动 分离 纯化 fmd 病毒 抗原 方法 | ||
【主权项】：
1.一种应用模拟流动床分离纯化FMD灭活病毒抗原的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、用平衡缓冲溶液平衡模拟流动床的色谱层析柱；S2、将FMD灭活病毒抗原样品上样至模拟流动床色谱层析柱中，上样过程中可同时对色谱层析柱进行抗原样品杂质清洗及样品解吸洗脱，色谱填料的清洗再生及平衡液平衡，在连续解吸洗脱过程中收集纯化后的样品。
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- 本发明公开了一种口蹄疫抗原的多步连续集成纯化方法，是从BHK‑21悬浮细胞培养的口蹄疫病毒液中多步连续集成纯化得到口蹄疫抗原，包括经离心澄清、超滤浓缩和/或深层过滤澄清后的离子交换层析等步骤。该多步连续集成纯化方法，使用深层过滤技术结合PEG沉淀法去除口蹄疫超滤浓缩液中的部分杂蛋白成分，再根据口蹄疫抗原表面所带电荷的差异性，应用离子交换层析和疏水层析进行多步层析纯化的工艺。本发明可用于高纯度口蹄疫抗原的制备，对超滤浓缩液的单次处理量可达900ml，纯度可达到90％，适用于要求纯度大于90％的口蹄疫抗原的大规模生产，并可根据生产规模进行扩缩，用于生产高纯度抗原的精制口蹄疫疫苗。
- 口蹄疫病毒非结构蛋白3B抗原表位肽及其应用-201811126936.3
- 周国辉;于力;杨德成;王海伟;孙超 - 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
- 2018-09-26 - 2021-04-23 - C07K14/09
- 本发明公开了口蹄疫病毒非结构蛋白3B抗原表位肽及其应用。本发明通过细胞融合技术筛选获得一株杂交瘤细胞系2H1，其分泌的单抗广谱性好、保守性高、亲和力强，并且与检测血清有强竞争性。本发明准确鉴定了单抗2H1所识别的抗原表位，其序列为SEQ ID No.2所示；本发明对该抗原表位肽突变得到系列突变体。本发明提供的抗原表位肽及其突变体与口蹄疫感染猪、牛、羊的FMDV抗体阳性血清呈现良好反应能力，用其作为包被抗原建立的抗体ELISA试剂盒能准确区分FMDV感染血清与抗原免疫血清，并且用一种该检测试剂盒就能检测任何动物种属的血清，跨越了种间屏障，具有可靠性高、应用性宽、广谱性好、检测更为快捷方便等优点。
- 口蹄疫病毒非结构蛋白3A抗原表位肽及其应用-201811126944.8
- 周国辉;于力;杨德成;王海伟;孙超 - 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
- 2018-09-26 - 2021-04-23 - C07K14/09
- 本发明公开了口蹄疫病毒非结构蛋白3A抗原表位肽及其应用。本发明通过细胞融合技术筛选获得一株杂交瘤细胞系3A10，其分泌的单抗具有广谱性及高亲和力，并且与血清竞争性强。本发明进一步对单抗3A10所识别的抗原表位进行了精确鉴定，其氨基酸序列为SEQ ID No.2所示，位于口蹄疫病毒非结构蛋白3A蛋白。本发明进一步对该抗原表位肽进行突变得到一系列突变体。本发明提供的抗原表位肽及其突变体作为包被抗原建立的口蹄疫抗体ELISA检测试剂盒能够特异性区分FMDV感染血清与抗原免疫血清，采用一种该检测试剂盒即能准确检测任何动物种属的血清，跨越了种间屏障，具有可靠性高、应用性宽、广谱性好、检测快捷方便等优点。
- 猪口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫检测试剂盒-201710843271.7
- 张蕾;董春娜;肖进;李静;巴利民;张欣;王楠;宋芳;栗利芳;张艳宾;王振豹;齐鹏;赵洪涛;张君 - 中牧实业股份有限公司
- 2017-09-18 - 2021-04-13 - C07K14/09
- 本发明公开了一种猪口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫检测试剂盒。它包括口蹄疫病毒非结构蛋白抗原表位多肽包被的酶联反应板和酶标记抗抗体；所述口蹄疫病毒非结构蛋白抗原表位多肽为序列表中序列1所示的多肽、序列2所示的多肽、序列3所示的多肽及序列4所示的多肽。本试剂盒使用化学合成非结构蛋白抗原肽包被反应板，抗原用量少、灵敏性和特异性高，可以高效地检测是否存在口蹄疫病毒感染。本发明试剂盒特异性好、敏感、高效，具有良好的市场前景。
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