[发明专利]应用模拟流动床分离纯化FMD灭活病毒抗原的方法

权利要求书

1.一种应用模拟流动床分离纯化FMD灭活病毒抗原的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、用平衡缓冲溶液平衡模拟流动床的色谱层析柱；

S2、将FMD灭活病毒抗原样品上样至模拟流动床色谱层析柱中，上样过程中可同时对色谱层析柱进行抗原样品杂质清洗及样品解吸洗脱，色谱填料的清洗再生及平衡液平衡，在连续解吸洗脱过程中收集纯化后的样品；

所述模拟流动床色谱层析柱中装填的色谱填料为带有疏水或离子型配基的高强度聚合物填料；

所述带有疏水或离子型配基的高强度聚合物填料为：以丙烯酸酯、苯乙烯基苯、二乙烯基苯、苯乙烯、二氧化硅刚性琼脂糖、二氧化硅刚性葡聚糖或刚性纤维素中的至少一种为基质，以羟丙基、丙基、苄基、异丙基、苯基、正丁基、叔丁基、丁硫基、戊基、辛烷基、二乙基氨基乙基、磺酸基、季氨基、羧甲基、二乙基氨基丙基中的至少一种为配基的填料。

2.根据权利要求1所述的应用模拟流动床分离纯化FMD灭活病毒抗原的方法，其特征在于，所述S2的具体步骤为：

A、将FMD灭活病毒抗原样品上样至模拟流动床色谱层析柱中，上样过程中检测每根色谱层析柱流出液，当检测到第n根色谱层析柱流出液中FMD灭活病毒抗原流出液与上样样品的UV吸收一致时，则将料液分配至第n+1根色谱层析柱内，同时对已饱和吸附抗原的色谱层析柱进行样品洗涤杂质及样品解吸获得FMD灭活病毒抗原纯化样品；

B、当检测到第n+1根色谱层析柱流出液中FMD灭活病毒抗原流出液与上样样品的UV吸收一致时，将料液分配至第n+2根色谱层析柱，同时对已饱和吸附抗原的色谱层析柱进行样品洗涤杂质及样品解吸获得灭活病毒抗原纯化样品，并清洗再生已洗脱完毕的层析柱；C、以此类推，直至第m+n根色谱柱树脂填料再生结束后，以平衡液平衡再生后的色谱层析柱继续用于吸附FMD灭活病毒抗原样品；

D、循环A至C的步骤，直至FMD灭活病毒抗原样品全部纯化完毕；

其中，所述n≥1，n+mn，n和m均为整数，n为首次料液分配进入的色谱层析柱数；n+m为系统总的色谱层析柱数。

3.根据权利要求2所述的应用模拟流动床分离纯化FMD灭活病毒抗原的方法，其特征在于，所述6≦n+m≦24。

4.根据权利要求1所述的应用模拟流动床分离纯化FMD灭活病毒抗原的方法，其特征在于，所述带有疏水或离子型配基的高强度聚合物填料为以苯乙烯和二乙烯基苯的聚合物为基质的填料。

5.根据权利要求4所述的应用模拟流动床分离纯化FMD灭活病毒抗原的方法，其特征在于，所述带有疏水或离子型配基的高强度聚合物填料的粒径为3um～20um，孔径

6.根据权利要求1或2所述的应用模拟流动床分离纯化FMD灭活病毒抗原的方法，其特征在于，采用疏水型配基的填料，所述的平衡缓冲液为pH7～9，电导率100～300ms/cm的硫酸铵、硫酸钠或氯化铵缓冲液；采用离子型配基的填料，所述的平衡缓冲液为pH7～9，电导率5～300ms/cm的硫酸铵、硫酸钠或氯化铵缓冲液。

7.根据权利要求1或2所述的应用模拟流动床分离纯化FMD灭活病毒抗原的方法，其特征在于，采用疏水型配基的填料，所述洗脱采用的洗脱溶液为pH7～9，电导率5～300ms/cm的硫酸铵、硫酸钠或氯化铵缓冲液；采用离子型配基的填料，所述洗脱采用的洗脱溶液为pH7～9，电导率100～300ms/cm的硫酸铵、硫酸钠或氯化铵缓冲液。

8.根据权利要求1或2所述的应用模拟流动床分离纯化FMD灭活病毒抗原的方法，其特征在于，所述清洗再生采用的再生清洗液为氢氧化钠溶液、乙醇溶液、甲醇溶液、异丙醇溶液、尿素溶液、中性界面表面活性剂中的至少一种。