本发明公开了一种稳定的非典型猪瘟病毒亚单位蛋白及其疫苗和制备方法和应用,其为非典型猪瘟病毒亚单位蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示,该亚单位蛋白具有良好的免疫原性。制备该亚单位蛋白的步骤为:1)将SEQ ID NO.1所示的基因序列克隆到真核表达载体中得到含有非典型猪瘟病毒亚单位蛋白编码基因的重组质粒;2)再将含有非典型猪瘟病毒亚单位蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中;3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株;4)发酵培养3)中所述的细胞株,纯化后得到非典型猪瘟病毒亚单位蛋白。本发明制备该亚单位蛋白的方法简单、成本低、易于放大。将适量亚单位蛋白与佐剂混合后得到亚单位疫苗,该疫苗具有良好的免疫原性。
本发明公开了非洲猪瘟病毒免疫原的p49突变融合蛋白、重组载体、工程菌及制备方法和应用,所述制备方法包括:1)将含有TrxA‑p49融合蛋白的编码基因克隆至原核表达载体中,得到含有TrxA‑p49融合蛋白的编码基因的重组质粒,所述p49为p49突变蛋白,其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示;2)再将步骤1)中的所述重组质粒转化至大肠杆菌细胞中,得到重组表达TrxA‑p49的菌株;3)通过培养、筛选、步骤2)中所述重组表达TrxA‑p49的菌株,得到高度表达的菌株;以及4)发酵培养步骤3)中所述高度表达的菌株,纯化后得到重组可溶性表达TrxA‑p49融合蛋白。本发明克服了现有技术中的缺陷,解决了大肠杆菌中不能直接大量可溶性表达P49蛋白且产量低的问题。
本发明提供了一种狂犬病毒表面的亚单位融合蛋白tG及其制备方法和应用,所述制备方法包括:1)将如SEQ ID NO.4所示的基因序列克隆到真核表达载体中,得到含有融合蛋白tG编码基因的重组质粒;2)再将含有融合蛋白tG编码基因的重组质粒转染至表达细胞中;3)通过培养、筛选、驯化步骤2)中所述表达细胞,得到高度表达的细胞株;4)发酵培养步骤3)中所述细胞株,纯化后,得到亚单位融合蛋白tG。本发明能够在大量可溶性表达tG,蛋白稳定,克服了现有技术中狂犬病毒表面G蛋白不能大规模表达等诸多问题,且制备方法简单、成本低。
本发明公开了一种重组的非洲猪瘟病毒EP153R亚单位跨膜蛋白的原核可溶性表达方法和应用,其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示,所述原核可溶性表达方法包括:1)根据大肠杆菌密码子偏嗜性特征,人工优化并合成非洲猪瘟病毒EP153R蛋白编码基因,所述氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示,基因序列如SEQ ID NO.1所示;2)将密码子优化后的非洲猪瘟病毒EP153R蛋白的基因如SEQ ID NO.1所示的编码基因序列克隆到原核表达载体中,得到含有非洲猪瘟病毒EP153R亚单位蛋白编码基因的重组质粒;3)EP153R亚单位跨膜蛋白表达与纯化。本发明能够提供一种可大规模工业化生产的非洲猪瘟跨膜蛋白EP153R亚单位蛋白且制备方法简单、成本低能够达到国家现有标准。
本发明公开了一种重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白及其制备方法和应用,其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示,所述制备方法如下:1)重组杆状病毒获得:将密码子优化后的非洲猪瘟病毒pK205R蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的表达基因克隆到转移载体pBacPAK8中,然后与线性化的DNA质粒共转染昆虫细胞,得到含有非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白表达基因的重组杆状病毒;2)发酵培养:再将所述重组杆状病毒进行扩大培养后进行发酵,收集培养液;3)亚单位蛋白纯化:对步骤2)中所述培养液进行纯化,纯化后得到重组的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位可溶性蛋白。本发明能够提供一种可大规模工业化生产的非洲猪瘟蛋白pK205R亚单位蛋白且制备方法简单、成本低能够达到国家现有标准。
本发明公开了一种重组的非洲猪瘟病毒结构蛋白DP96R亚单位蛋白及其制备方法和应用,其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示,所述制备方法如下:1)将密码子优化后的所述重组的非洲猪瘟病毒DP96R蛋白如SEQ ID NO.1所示的编码基因序列克隆到原核表达载体中,得到含有非洲猪瘟病毒DP96R亚单位蛋白编码基因的重组质粒;2)再将所述含有非洲猪瘟病毒DP96R亚单位蛋白编码基因的重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞中,得到重组工程菌;3)通过培养、筛选步骤2)中所述重组工程菌的菌株,得到高度表达的菌株;4)发酵培养步骤3)中所述高度表达的菌株,纯化后得到重组的非洲猪瘟病毒DP96R亚单位可溶性融合蛋白。本发明能够提供一种可大规模工业化生产的非洲猪瘟毒力相关蛋白DP96R亚单位蛋白且制备方法简单、成本低能够达到国家现有标准。
本发明公开了一种重组的非洲猪瘟病毒跨膜蛋白J18L亚单位蛋白及其制备方法和应用,其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示,所述制备方法如下:1)将密码子优化后的非洲猪瘟病毒J18L蛋白编码基因序列克隆到原核表达载体中,得到含有非洲猪瘟病毒J18L亚单位蛋白编码基因的重组质粒;2)再将所述含有非洲猪瘟病毒J18L亚单位蛋白编码基因的质粒重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞中,得到重组工程菌;3)中重组工程菌进行诱导表达,并从菌体裂解上清中纯化非洲猪瘟J18L亚单位蛋白。本发明能够提供一种可大规模工业化生产的非洲猪瘟跨膜蛋白J18L亚单位蛋白且制备方法简单、成本低能够达到国家现有标准。
本发明公开了一种重组的非洲猪瘟病毒p72亚单位蛋白及其制备方法及其应用,其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示,所述制备方法如下:1)将密码子优化后的非洲猪瘟病毒pB602L蛋白编码基因序列克隆到原核表达载体中,得到含有非洲猪瘟病毒pB602L亚单位蛋白编码基因的重组质粒;2)再将所述含有非洲猪瘟病毒pB602L亚单位蛋白编码基因的质粒重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞中,得到重组工程菌;3)中重组工程菌进行诱导表达,并从菌体裂解上清中纯化非洲猪瘟pB602L亚单位结构蛋白。本发明能够提供一种可大规模工业化生产的非洲猪瘟结构蛋白pB602L亚单位蛋白且制备方法简单、成本低能够达到国家现有标准。
本发明提供了一种狂犬病毒表面的亚单位融合蛋白mG及其制备方法和应用,所述制备方法包括:1)将如SEQ ID NO.4所示的基因序列克隆到真核表达载体中,得到含有融合蛋白MBP‑G编码基因的重组质粒;2)再将含有融合蛋白MBP‑G编码基因的重组质粒转染至表达细胞中;3)通过培养、筛选、驯化步骤2)中所述表达细胞,得到高度表达的细胞株;4)发酵培养步骤3)中所述细胞株,纯化后,得到亚单位融合蛋白mG。本发明能够在大量可溶性表达mG,蛋白稳定,克服了现有技术中狂犬病毒表面G蛋白不能大规模表达等诸多问题,且制备方法简单、成本低。
本发明公开了一种非洲猪瘟病毒免疫原的p49突变蛋白、重组载体、大肠杆菌基因工程菌及其制备方法和应用,所述制备方法包括:1)将含有TrxA‑p49融合蛋白的编码基因克隆至原核表达载体中,得到含有TrxA‑p49融合蛋白的编码基因的重组质粒,所述p49为p49突变蛋白,其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示;2)再将步骤1)中的所述重组质粒转化至大肠杆菌细胞中,得到重组表达TrxA‑p49的菌株;3)通过培养、筛选、步骤2)中所述重组表达TrxA‑p49的菌株,得到高度表达的菌株;以及4)发酵培养步骤3)中所述高度表达的菌株,纯化后得到重组可溶性表达TrxA‑p49融合蛋白。本发明克服了现有技术中的缺陷,解决了大肠杆菌中不能直接大量可溶性表达P49蛋白且产量低的问题。