[发明专利]一种抗病毒灭活酵母工程菌的制备方法

摘要

本申请公开了一种抗病毒灭活酵母工程菌的制备方法。该方法包括以下步骤将诱导表达出重组鸡干扰素的工程菌，通过71℃30min完全灭活处理后，利用MTT实验证明了灭活工程菌中含有的rChIFN‑α与rChIFN‑γ对新城疫病毒具有抑制作用，表明具有生态安全性的灭活工程菌仍然保留了其抗病毒生物学活性。本发明的方法简单易行，成本低廉，对家禽病毒病防治具有明显作用。

主权项

一种抗病毒灭活酵母工程菌的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)工程菌株的遗传稳定性鉴定：利用SC选择培养基对工程菌进行筛选，将工程菌株接种于SC固体选择培养基上，置于30℃条件下培养至单菌落形成，选取该单菌落接种于YPD培养基中振荡培养，提取基因组进行PCR鉴定，鉴定结果为阳性的菌株接种于YPD液体培养基中过夜培养；取适量该菌液涂布于麦芽汁固体培养基和接种于麦芽汁液体培养基，培养24h观察重组工程菌株的形态；同时取上述菌液适量接种于加半乳糖的诱导培养基中进行诱导培养，利用ELISA检测rChIFN；2)工程菌株的灭活：利用含有2％的半乳糖诱导培养基诱导培养至对数生长期的发酵菌液，直接经水浴灭活处理，制备得到抗病毒灭活酵母工程菌；3)灭活菌灭活效果检测：将灭活工程菌重悬于2ml灭菌生理盐水后，取200μl涂布到YPD固体培养基中，置30℃倒置培养48h后，观察有无单菌落的形成；4)灭活菌抗病毒活性检测：通过MTT实验检测灭活菌的抗病毒活性。