[发明专利]一种质粒载体及其构建方法有效
申请号: | 201710656310.2 | 申请日: | 2017-08-03 |
公开(公告)号: | CN107287230B | 公开(公告)日: | 2020-10-13 |
发明(设计)人: | 安迎锋;高和瑞;高嵩;张艺锋;许淑敏;刘霞 | 申请(专利权)人: | 沈阳农业大学 |
主分类号: | C12N15/70 | 分类号: | C12N15/70;C12N15/64 |
代理公司: | 北京市领专知识产权代理有限公司 11590 | 代理人: | 林辉轮 |
地址: | 110866 辽宁省沈阳市沈河*** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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摘要: | 本发明涉及基因工程领域,具体的说是一种兼具定向TA克隆,无背景粘性末端克隆和表达功能的质粒载体及其构建方法。质粒载体为闭合环状的双链DNA,含有两个多克隆位点区,在两个多克隆位点区之间存在一个ccdB表达框,可在多数大肠杆菌菌株中组成型表达毒性蛋白ccdB,作为负筛选标记。基于质粒载体的多克隆位点的设计,该质粒可用于进行定向TA克隆和改进的无背景粘性末端克隆。另外,本质粒载体还可以直接用于蛋白表达和纯化。各功能均得到验证。本发明所涉及的质粒载体因其更方便和高效,将在基因工程领域发挥重要的作用。 | ||
搜索关键词: | 一种 质粒 载体 及其 构建 方法 | ||
【主权项】:
一种质粒载体,其特征在于:质粒载体为闭合环状双链DNA,含有两个BsaI酶切位点(5’‑GGTCTCN↓NNNNN‑3’)、粘性末端;含有两个特定序列的AhdI酶切位点、一半的AvrII和NcoI识别位点序列,克隆位点之间含有一个ccdB 表达框。
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