[发明专利]一种质粒载体及其构建方法有效
| 申请号： | 201710656310.2 | 申请日： | 2017-08-03 |
| 公开（公告）号： | CN107287230B | 公开（公告）日： | 2020-10-13 |
| 发明（设计）人： | 安迎锋;高和瑞;高嵩;张艺锋;许淑敏;刘霞 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/64 |
| 代理公司： | 北京市领专知识产权代理有限公司 11590 | 代理人： | 林辉轮 |
| 地址： | 110866 辽宁省沈阳市沈河*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 质粒 载体 及其 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种兼具定向TA克隆，无背景粘性末端克隆和表达功能的质粒载体，该质粒框架同时兼具多种基因克隆和表达的组成原件，其特征在于：包括具备含有两个特定序列的AhdI酶切位点，也就是5’-GACCCT↓GGGTC-3’和5’-GACCTA↓TGGTC-3’，结合插入DNA片段的特定引物设计，以及DNA连接过程中同步AvrII/NcoI双酶切，用于定向TA克隆；具备BsaI酶切位点，用于粘性末端克隆；多克隆位点之间具有ccdB毒性蛋白基因，作为负筛选标记，用于在无需胶回收的情况下，去除克隆过程中可能引入的假阳性；具备T7启动子和T7终止子，用于高效表达外源蛋白，所述的质粒载体具有SEQ ID No:1中所示的碱基序列。
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