[发明专利]一步法实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测人细胞角蛋白7的试剂盒

摘要

本发明为一种一步法实时荧光定量RT‑PCR检测人细胞角蛋白7 试剂盒，该试剂盒以mRNA为模板，使反转录和实时荧光定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需打开管盖，避免了交叉污染，并可以精确定量检测标本中人细胞角蛋白7(CK7) 的mRNA表达量。该试剂盒可以用于临床及科研中检测患者外周血、淋巴结等标本中CK7的表达，用以辅助诊断、指导治疗结直肠癌及提示预后。

主权项

1.一种一步法实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测人细胞角蛋白7的试剂盒，含逆转录聚合酶链反应液、莫洛尼氏鼠白血病病毒 (M‑MuLV) 逆转录酶、RNA酶抑制剂、耐热性DNA聚合酶、标准品及阴阳性对照品；其特征是：逆转录聚合酶链反应液含有焦炭酸二乙酯处理的水、逆转录聚合酶链反应缓冲液、寡聚(dT)15‑18、dNTPs、MgCl2、检测用上游引物、检测用下游引物、荧光探针，其中：检测用上游引物序列为5’—ACCAGTTCGCCATGGATGAC—3’，检测用下游引物序列为5’—GATCTGGGTCATCTTTTCACGG—3’，荧光探针序列为5’—FAM—TCGCTGCGCTCGTCGTCGA—TAMRA—3’，标准品序列为ACCAGTTCGCCATGGATGACGATATCGCTGCGCTCGTCGTCGACAACGGCTCCGGCATGTGCAAGGCCGGCTTCGCGGGCGACGATGCTCCCCGGGCCGTCTTCCCCTCCATCGTGGGCCGCCCTAGGCACCAGGGTGTGATGGTGGGTATGGGTCAGAAGGACTCCTACGTGGGCGACGAGGCCCAGAGCAAGAGAGGCATCCTGACCCTGAAGTACCCCATTGAACACGGCATTGTCACCAACTGGGACGATATGGAGAAGATTTGGCACCACACTTTCTACAATGAGCTGCGTGTGGCCCCTGAGGAGCACCCTGTGCTGCTCACCGAGGCCCCTCTGAACCCTAAGGCCAACCGTGAAAAGATGACCCAGATC。