[发明专利]基于核酸层析生物传感技术检测食源性致病菌的方法

摘要

本发明涉及一种基于核酸层析生物传感技术检测食源性致病菌的方法，根据致病菌筛选出高特异性毒力基因，建立新型通用接头重组聚合酶扩增技术，组装出基于肽核酸的单链核酸层析试纸条，并依此建立了一种基于功能核酸的通用接头阻断RPA生物传感器检测技术，用于食源性致病菌的现场快速检测，能够高效捕获单链核酸，提高检测灵敏度和稳定性，实现可视化检测。

主权项

一种基于肽核酸的核酸层析试纸条，其特征在于，所述试纸条的制备方法包括以下步骤：1)纳米金颗粒的制备；2)肽核酸探针的制备：人工合成质控捕获探针CCP、检测捕获探针TCP和连接探针P，它们的序列分别为：质控捕获探针CCP：5’‑biotin‑TGGTGGTGCTGGTT‑3’检测捕获探针TCP：5’‑biotin‑AACCAGCACCACCA‑3’连接探针P：5’‑Cys‑AACCAGCACCACCA‑Glu‑Glu‑Glu‑3’3)纳米金修饰的连接探针P的制备；4)基于肽核酸的核酸层析试纸条的组装：所述试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，其中，所述硝酸纤维素膜上设有至少1条检测线和1条质控线；①将样品垫和结合垫浸泡在缓冲液中，然后37℃烘干2‑3h；所述缓冲液为：0.25‑0.5％Triton X‑100，0.1‑0.2M硼酸盐缓冲液，0.15‑0.3M NaCl，pH 8.0；其中，所述结合垫上固定有纳米金修饰的连接探针P；②将30‑50μL的1mg/ml链霉亲和素溶液与30‑50μL的100μM肽核酸捕获探针溶液进行混合，然后在室温下孵育1‑2h，分别制备出链霉亲和素‑生物素化的质控捕获探针和检测捕获探针，然后分别在硝酸纤维素膜上划出质控线和检测线，37℃烘干12‑14h；③将上述样品垫、结合垫、带有质控线和检测线的硝酸纤维素膜以及吸收垫依次粘贴在底板上，完成试纸条的组装。