[发明专利]一种检测食管鳞癌相关基因TFPI2和HSPB2启动子甲基化程度的试剂盒

摘要

本发明涉及一种检测食管鳞癌相关基因TFPI2和HSPB2启动子甲基化程度的试剂盒，包括TFPI2和HSPB2基因启动子CpG位点的甲基化特异性扩增正向引物、反向引物及其非甲基化特异性扩增正向引物和反向引物、内参基因ACTB扩增正向引物和反向引物；TFPI2基因启动子CpG位点为TFPI2基因起始密码子(ATG)上游300bp序列内所包含的至少一个CpG位点；HSPB2基因启动子CpG位点为HSPB2基因起始密码子(ATG)上游300bp序列内所包含的至少一个CpG位点；内参基因ACTB扩增引物不包含ACTB基因序列内任何CpG位点；本发明采用两个基因联合检测的方法，大大增加了检测的准确度和特异性，在食管鳞癌的临床辅助诊断中具有广阔的应用前景。

主权项

一种检测食管鳞癌相关基因TFPI2和HSPB2启动子甲基化程度的试剂盒，其特征在于：包括TFPI2和HSPB2基因启动子CpG位点的甲基化特异性扩增正向引物、反向引物及其非甲基化特异性扩增正向引物和反向引物、内参基因ACTB扩增正向引物和反向引物；所述TFPI2基因启动子CpG位点为TFPI2基因起始密码子ATG上游300bp序列内所包含的至少一个CpG位点；所述HSPB2基因启动子CpG位点为HSPB2基因起始密码子ATG上游300bp序列内所包含的至少一个CpG位点；所述内参基因ACTB扩增引物不包含ACTB基因序列内任何CpG位点；所述的TFPI2基因启动子CpG位点的甲基化特异性扩增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：5’‑CGGTCGGACGTTCGTTTCGTATAAAGC‑3’；所述的TFPI2基因启动子CpG位点的甲基化特异性扩增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：5’‑GAACGACCCGCTAAACAAAACGT‑3’；所述的TFPI2基因启动子CpG位点的非甲基化特异性扩增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示：5’‑TTGGTTGGATGTTTGTTTTGTATAAAGTG‑3’；所述的TFPI2基因启动子CpG位点的非甲基化特异性扩增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示：5’‑AAACAACCCACTAAACAAAACATC‑3’；所述的HSPB2基因启动子CpG位点的甲基化特异性扩增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示：5’‑CGTGTAAATCGTTTGTGAGGGTTTTAGC‑3’；所述的HSPB2基因启动子CpG位点的甲基化特异性扩增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示：5’‑CGAAAATATAACCAACGCCGCCC‑3’；所述的HSPB2基因启动子CpG位点的非甲基化特异性扩增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示：5’‑TGTGTAAATTGTTTGTGAGGGTTTTAGTG‑3’；所述的HSPB2基因启动子CpG位点的非甲基化特异性扩增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示：5’‑CAAAAATATAACCAACACCACCCAAACCC‑3’；所述的ATCB基因扩增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示：5’‑GTGTTTAAGATAGTGTTGTGGGTG‑3’；所述的ATCB基因扩增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示：5’‑CCTACTATACACCTACTTAATACACACTCC‑3’。