[发明专利]一种检测食管鳞癌相关基因TFPI2和HSPB2启动子甲基化程度的试剂盒

权利要求书

1.一种检测食管鳞癌相关基因TFPI2和HSPB2启动子甲基化程度的试剂盒，其特征在于：包括TFPI2和HSPB2基因启动子CpG位点的甲基化特异性扩增正向引物、反向引物及其非甲基化特异性扩增正向引物和反向引物、内参基因ACTB扩增正向引物和反向引物；

所述TFPI2基因启动子CpG位点为TFPI2基因起始密码子ATG上游300bp序列内所包含的至少一个CpG位点；所述HSPB2基因启动子CpG位点为HSPB2基因起始密码子ATG上游300bp序列内所包含的至少一个CpG位点；所述内参基因ACTB扩增引物不包含ACTB基因序列内任何CpG位点；

所述的TFPI2基因启动子CpG位点的甲基化特异性扩增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：

5’-CGGTCGGACGTTCGTTTCGTATAAAGC-3’；

所述的TFPI2基因启动子CpG位点的甲基化特异性扩增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：

5’-GAACGACCCGCTAAACAAAACGT-3’；

所述的TFPI2基因启动子CpG位点的非甲基化特异性扩增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示：

5’-TTGGTTGGATGTTTGTTTTGTATAAAGTG-3’；

所述的TFPI2基因启动子CpG位点的非甲基化特异性扩增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示：

5’-AAACAACCCACTAAACAAAACATC-3’；

所述的HSPB2基因启动子CpG位点的甲基化特异性扩增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示：

5’-CGTGTAAATCGTTTGTGAGGGTTTTAGC-3’；

所述的HSPB2基因启动子CpG位点的甲基化特异性扩增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示：

5’-CGAAAATATAACCAACGCCGCCC-3’；

所述的HSPB2基因启动子CpG位点的非甲基化特异性扩增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示：

5’-TGTGTAAATTGTTTGTGAGGGTTTTAGTG-3’；

所述的HSPB2基因启动子CpG位点的非甲基化特异性扩增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示：

5’-CAAAAATATAACCAACACCACCCAAACCC-3’；

所述的ATCB基因扩增正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示：

5’-GTGTTTAAGATAGTGTTGTGGGTG-3’；

所述的ATCB基因扩增反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示：

5’-CCTACTATACACCTACTTAATACACACTCC-3’。

2.如权利要求1所述的检测食管鳞癌相关基因TFPI2和HSPB2启动子甲基化程度的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括阴性质控品、阳性质控品和无模板对照。

3.如权利要求2所述的检测食管鳞癌相关基因TFPI2和HSPB2启动子甲基化程度的试剂盒，其特征在于：所述阳性质控品为亚硫酸氢盐修饰的全甲基化人类基因组DNA，所述阴性质控品为亚硫酸氢盐修饰的非甲基化人类基因组DNA，所述无模板对照是指不含人类基因组DNA的反应体系。

4.如权利要求3所述的检测食管鳞癌相关基因TFPI2和HSPB2启动子甲基化程度的试剂盒，其特征在于：所述无模板对照是用无菌水代替模板DNA的反应体系。

5.如权利要求1所述的检测食管鳞癌相关基因TFPI2和HSPB2启动子甲基化程度的试剂盒，其特征在于：所述引物的纯度达到PAGE级或HPLC级。

6.如权利要求1所述的检测食管鳞癌相关基因TFPI2和HSPB2启动子甲基化程度的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中，荧光PCR扩增反应体系的终浓度组成为：1～10×PCR缓冲液、0.1～1mMdNTPs、0.05～20ng/μl模板DNA、0.01～0.10Μ/μl Taq DNA聚合酶、1～5mM氯化镁、1～2×SYBR Green核酸染料、0.1～1μM引物。