[发明专利]利用枯草芽孢杆菌表达天蚕素AD的方法及其制备方法

摘要

本发明涉及一种利用枯草芽孢杆菌表达天蚕素AD的方法及其制备方法。以枯草芽孢杆菌WB800N为宿主菌株，大肠‑枯草穿梭载体为表达载体，设计合成融合蛋白编码基因(SPSacB)SUMO‑CAD，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，成功构建重组表达载体pGJ148‑(PSacB)SUMO‑CAD。应用化学转化方式转入宿主菌感受态细胞中，利用麦芽糖诱导发酵，实现外源蛋白成功表达，通过NI‑NTA柱和蛋白质纯化分析仪纯化后获得了纯度较高的融合蛋白，利用SUMO酶切后获得重组抗菌肽，之后对发酵条件进行优化。本发明成本低，利于分离纯化。

主权项

一种利用枯草芽孢杆菌表达天蚕素AD的方法，其特征在于，方法如下：(1)、基因合成：人工设计编码目的基因片段，在天蚕素AD基因上游融合信号肽SPsacB基因、六个组氨酸基因、SUMO标签，并在5’端加上EcoRI酶切位点，在3’端加上终止密码子和BamHI酶切位点，整条融合基因SPsacB‑6×His‑SUMO‑Cecropin AD，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；(2)、表达质粒的构建及转化：表达载体以大肠杆菌‑枯草芽孢杆菌穿梭载体pGJ148作为骨架，启动子为麦芽糖启动子Pglv，以基因缺陷型菌株枯草芽孢杆菌WB800N作为表达宿主菌，利用化学转化方法将重组载体直接转化到表达宿主菌枯草芽孢杆菌WB800N中，表达产物经过纯化蛋白酶切后进行Tricine‑SDS‑PAGE定性和质谱检测分析，实现融合蛋白的表达。