本发明提供一种耐蛋白酶水解的高稳定抗菌肽HW及其制备方法和应用，属于农业畜牧兽医应用领域，其序列如SEQ ID No.1所示；本发明通过合理的将脯氨酸P放置在精氨酸R旁边以保护精氨酸R免受蛋白酶的识别，引入不受蛋白酶识别的组氨酸H为高稳定抗菌肽额外提供正电荷，防止精氨酸R被过多水解导致抗菌肽的正电性不足而失活，制出一条高稳定抗菌肽HW。本发明的高稳定抗菌肽HW在胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶存在下对大肠杆菌具有高效抑菌活性，同时对人血红细胞没有毒性，使其具备成为饲用抗生素替代物的潜力。
本发明提供一种高蛋白酶稳定性色氨酸富集抗菌肽及其制备方法和应用，抗菌肽序列如SEQ ID No.1所示。选择Trp和Arg作为疏水和带电核心，并将Arg置于Trp前方，随后利用Pro对Trp和Arg进行保护，得到RPWP的序列结构单元，将该结构单元重复5遍后得到一条抗酶解短肽，将其C端酰胺化。本抗菌肽对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌菌种有明显的杀菌作用，且溶血活性和细胞毒性较低，抗菌活性高达6.50μM，细胞选择性指数达到39.40。在人工模拟肠胃液和10mg/mL糜蛋白酶溶液仍保持良好的抗菌活性，并显著降低大肠杆菌感染小鼠腹腔内的细菌负载量，在动物体内同样具备优异的抗菌功能。
本发明提供一种富含Trp的α‑螺旋结构抗菌肽W33及其制备方法和应用。抗菌肽W33，如SEQ ID No.1所示，制备方法是：利用标准α螺旋七肽重复序列“abcdefg”为基础，选择Leu放置在a、d位置上形成Leu拉链结构，在c和f位置添加Trp，其余位置添加Arg，将七肽序列重复2次达到足够的正电荷数，得出抗菌肽W33。该抗菌肽在治疗革兰氏阴性菌和/或革兰氏阳性菌感染性疾病的药物中的应用。抗菌肽W 33治疗指数为98.84，具有良好的细胞选择性，有潜力成为治疗革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌感染的广谱抗菌药物，并有很高的应用价值。
本发明公开一种基于Fmoc基团诱导的自组装抗菌肽W7ff及其制备方法与其自组装结构的应用，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，分子式如式(I)所示：#imgabs0#将W7ff在PB缓冲液中，于80℃下孵育1h后，获得自组装纳米结构。自组装后的W7ff对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌杀菌活性较好；组装前后W7ff在组装前后的溶血率均随着肽浓度的增加而升高，浓度小于64μM时溶血率低于10％，在最小抑菌浓度范围内无溶血现象出现，均有良好的生物相容性。综上所述，本发明的抗菌肽W7ff具有自组装能力，是一条拥有较好抑菌活性和生物相容性的抗菌肽。
本发明提供一种HD6仿生纳米捕获肽及其制备方法和应用，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；制备方法如下：交替排布带有正电荷的精氨酸和极性不带电的谷氨酰胺，并连续排布非极性残苯丙氨酸，得到RFQF的序列结构单元，将该结构单元重复4遍作为自组装成阳离子肽纤维骨架。采用GSGS作为柔性接头与乳铁蛋白28‑34活性识别区域RKVRGPP相连接，构建仿生纳米捕获肽序列结构。本发明的仿生纳米捕获肽在生理环境中能形成致密的纳米纤维网，对大肠杆菌捕获能力较强，并促进巨噬细胞对细菌团的吞噬能力。综上所述，本发明的HD6仿生纳米捕获肽极具发展潜能，且应用价值较高。
本发明提供一种抑制革兰氏阴性菌的窄谱抗菌肽PC及其制备方法和应用，属于农业畜牧兽医应用领域，其序列如SEQ ID No.1所示；以(RP)3WW(RP)3为基本单元，精氨酸R为抗菌肽提供靶向革兰氏阴性菌的正电荷，色氨酸W为抗菌肽提供杀灭病原体的疏水力，脯氨酸P阻止抗菌肽与革兰氏阳性菌相互作用，提高对革兰氏阴性菌的选择性，将PR串联重复三次；将序列CTKSIPPIC引入到抗菌肽序列中，提高空间位阻，降低抗菌肽破坏革兰氏阳性菌的能力，抗菌肽命名为PC。本发明的窄谱抗菌肽PC对革兰氏阴性菌具有较高的抑菌活性，而对革兰氏阳性菌无抑菌活性，而且对人血红细胞没有毒性，具备成为饲用窄谱抗生素替代物的潜力。
本发明提供一种色氨酸和亮氨酸跨链交互作用β‑发卡抗菌肽WLF及制备方法。抗菌肽WLF的序列如SEQ ID No.1所示。制备方法以色氨酸和亮氨酸跨链交互作用和PG为转角单元，抗菌肽的模板为XWRYRPGRWRYX‑NH2，其中X为疏水性氨基酸，Y为亮氨酸，当X＝F、Y＝L时，抗菌肽的命名为WLF。抗菌肽WLF对革兰氏阴性菌和/或革兰氏阳性菌引起的细菌感染性疾病均具有较好的治疗作用。本抗菌肽在取代二硫键的前提下仍然具有较好的稳定性，在保持较好的抑菌活性前提下，溶血活性较低，治疗指数高达137.27。认为抗菌肽WLF具有成为抗生素代替物的潜力。
本发明公开一种色氨酸和苯丙氨酸跨链交互作用β‑发卡抗菌肽WFL及其制备方法和应用。抗菌肽WFL的序列如SEQ ID No.1所示，本发明以PG为转角单元，通过色氨酸和苯丙氨酸形成的对跨链之间的相互作用，稳定β‑发夹结构，得到多肽模板XWRYRPGRWRYX‑NH2，X为疏水性氨基酸，Y为苯丙氨酸，当X＝L,Y＝F时，抗菌肽的命名为WFL。并公开了抗菌肽WFL在制备治疗由革兰氏阴性菌或/和革兰氏阳性菌引起的感染性疾病的药物中应用。本发明在取代二硫键的前提下，既保持较好的稳定性，又降低抗菌肽的毒性，在检测范围内没有发现溶血现象，治疗指数高达155.62。综上所述，抗菌肽WFL具有较高的应用价值。
本发明公开一种Trp‑pocket跨链交互型高稳定性β‑发卡抗菌肽WpLFPG及制备方法和应用。该抗菌肽序列如SEQ ID No.1所示。本发明以Pro‑Gly作转角单元，利用Trp残基在β‑发卡抗菌肽的一个表面上形成一个pocket结构，以此设计出了XWRWRPGXKXYR‑NH2的β‑发卡模板，当X＝F，Y＝L时，抗菌肽命名为WpLFPG；并公开了该抗菌肽在制备治疗由革兰氏阴性菌或/和革兰氏阳性菌引起的感染性疾病的药物中应用。该抗菌肽对多种细菌具有极强的抑菌活性和可忽略不计的溶血，治疗指数达到123.08，此外，在多种生理环境和极端条件下具有较高的稳定性，该抗菌肽具有较强替代抗生素的潜力。
本发明公开一种高效的抗菌肽FRRFFP及其制备方法和应用，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；制备方法如下：精氨酸被选择以提供正电荷、选择苯丙氨酸提供疏水性以满足抗菌肽的基本特征；选择苯丙氨酸保证疏水性的同时避免过度细胞毒性，选择PG转角将“FFFF”结构拆分，进一步降低细胞毒性。本发明还公开了该高效的抗菌肽FRRFFP在制备治疗由革兰氏阳性菌或/和革兰氏阴性菌引起的感染性疾病的药物中的应用。本发明的抗菌肽FRRFFP对病原菌具有广谱抑制作用，而且溶血活性较低，治疗指数达到90.46，具有较强的生理环境下的稳定性，成为抗生素替代品的应用潜力。
