[发明专利]一种基于萤光素校正的细胞碱性磷酸酶活性检测方法在药物筛选中的应用

摘要

一种基于萤光素校正的细胞碱性磷酸酶活性检测方法在药物筛选中的应用，本发明属于生物医药领域，涉及一种检测细胞中碱性磷酸酶活力的方法，包括以下步骤A、对培养的细胞进行基因工程修饰，导入非分泌型萤光素酶报告基因；B、加入药物干预C、吸弃培养液并洗涤，加入细胞裂解液裂解细胞，得到细胞裂解液；D、检测E、计算等步骤。本发明提供的技术方案通过结合萤光素酶报告基因手段达到量化细胞活力量化的目的，从而指示药物干预中细胞碱性磷酸酶活力和细胞活力两个维度的信息，并最终形成参数化指标反映不同药物对单个细胞碱性磷酸酶活力的影响。

主权项

一种基于萤光素校正的细胞碱性磷酸酶活性检测方法在药物筛选中的应用，其特征在于，包括以下步骤：A、对培养的细胞进行基因工程修饰，导入非分泌型萤光素酶报告基因；B、加入药物干预C、吸弃培养液并洗涤，加入细胞裂解液裂解细胞，得到细胞裂解液；D、检测：取部分细胞裂解液加入含有萤光素酶发光底物的溶液得到样品，检测样品得到发光度值RLU；另取部分细胞裂解物或直接向发光检测后的样品中，加入碱性磷酸酶显色底物溶液，以空白裂解液校正检测产物吸光度；以分解产物为标准品溶液计算的标准曲线，标定样品分解产物产生量，为A；上述检测步骤均以空白裂解液位参比样品；E、根据得到的RLU与 A比值，计算最终萤光素校正的细胞碱性磷酸酶活性Q值，公式为Q=A/RLU。