[发明专利]一种利用病毒RNA表达机制进行条件表达筛选、清除被病毒感染的细胞的方法

摘要

本发明属于生物回路的设计及使用方法领域，具体涉及一种利用病毒RNA表达机制进行条件表达筛选、清除被病毒感染的细胞的方法。现有实验室中对感染病毒的细胞进行标记的方法需要对病毒进行基因重组或标记，本发明方法可以实现在不对病毒进行基因改造和标记的条件下实现对被某些野生型病毒感染的细胞的筛选；本发明利用病毒基因组复制表达机制令被病毒感染的细胞表达特定基因，应用此方法，可以在细胞群中特异性的使被病毒感染的细胞表达外源基因，并且不会影响细胞群中其他正常细胞的生命活动；本发明还通过设置不同的外源基因来实现不同的功能，例如可以设置荧光蛋白基因使被病毒感染的细胞显色，设置死亡基因来清除被病毒感染的细胞，表达出改造的病毒蛋白干扰病毒复制等。

主权项

1.一种利用病毒RNA表达机制进行条件表达筛选或清除被病毒感染细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)获取病毒RNA序列；(2)设计负链RNA：根据步骤(1)获得的病毒RNA序列，设计一个模仿病毒RNA与病毒核酸酶相互作用的负链RNA；所述负链RNA上带有用来进行筛选或者用来进行杀伤细胞的外源基因的互补序列，并且所述负链RNA链可以利用病毒RNA复制机制产生互补的正链RNA或者亚基因组mRNA；(3)导入设计的负链RNA：将步骤(2)设计的负链RNA导入到细胞内，使细胞中存在负链RNA，负链RNA和其模仿的RNA病毒应在细胞中处于相同的位置；(4)条件表达RNA激活，产生可翻译的正链RNA：在设计的负链RNA被成功导入细胞指定位置并且在此负链RNA没有被细胞降解之前，如果病毒成功感染细胞并在细胞内复制表达，那么设计的负链RNA便可以利用病毒RNA与核酸酶的作用机制进行转录和RNA复制，产生全基因组正链RNA序列或亚基因组mRNA序列；(5)条件表达RNA的复制：步骤(4)产生的全基因组正链RNA序列或亚基因组mRNA序列模仿病毒进行复制；(6)翻译：全基因组正链RNA序列或亚基因组mRNA在病毒控制的细胞翻译进程下和病毒的基因一起被翻译，不受病毒对细胞正常翻译抑制的影响；(7)细胞筛选：根据翻译出的外源蛋白质，筛选出被病毒感染的细胞；或者细胞清除：外源基因为对细胞有杀伤作用的死亡基因，则翻译出的外源蛋白质可以将细胞杀死并终结细胞中正在进行的病毒增殖进程。