[发明专利]高通量筛选高效表达外源蛋白的重组里氏木霉的方法有效
| 申请号： | 201210271826.2 | 申请日： | 2012-08-01 |
| 公开（公告）号： | CN102876706A | 公开（公告）日： | 2013-01-16 |
| 发明（设计）人： | 董志扬;秦丽娜 | 申请（专利权）人： | 中国科学院微生物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/64;G01N15/14;G01N21/64;C12N15/62;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N9/20;C12R1/885 |
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| 地址： | 100101 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了高通量筛选高效表达外源蛋白的重组里氏木霉的方法。该高通量筛选高效表达外源蛋白的重组里氏木霉的方法包括如下步骤：比较经流式细胞仪鉴定的表达外源蛋白的重组里氏木霉的红色荧光强度，根据红色荧光强度的高低鉴定外源蛋白的表达能力，红色荧光强度越高的表达外源蛋白的重组里氏木霉的外源蛋白表达能力越高。其中的外源蛋白基因以融合基因的形式导入里氏木霉，该融合基因是将红色荧光蛋白基因通过连接肽2A序列与外源蛋白基因连接得到的融合基因，所述外源蛋白基因位于所述红色荧光蛋白基因的上游或下游；所述外源蛋白基因的5′端具有信号肽序列；所述连接肽2A序列编码序列表中序列8的第290-306位所示的连接肽2A。 | ||
| 搜索关键词： | 通量 筛选 高效 表达 蛋白 重组 里氏 方法 | ||
【主权项】：
鉴定或辅助鉴定表达外源蛋白的重组里氏木霉的方法，包括如下步骤：1）将红色荧光蛋白基因通过连接肽2A序列与外源蛋白基因连接得到融合基因，所述外源蛋白基因位于所述红色荧光蛋白基因的上游或下游；所述外源蛋白基因的5′端具有信号肽序列；所述连接肽2A序列编码序列表中序列8的第290‑306位所示的连接肽2A；2）制备融合基因表达盒和筛选标记基因表达盒以及含有所述融合基因表达盒和所述筛选标记基因表达盒的重组表达载体；3）用所述重组表达载体转化里氏木霉，得到转化子；培养所述转化子并制备成原生质体，收集所述转化子的原生质体细胞；4）用流式细胞仪对步骤3）的所述原生质体细胞进行分选，有红色荧光的所述转化子为表达外源蛋白的重组里氏木霉或候选表达外源蛋白的重组里氏木霉，无红色荧光的所述转化子为非表达外源蛋白的重组里氏木霉或候选非表达外源蛋白的重组里氏木霉。
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