[发明专利]一种尿蛋白制备方法及尿蛋白质组的检测方法在审
| 申请号： | 201710048099.6 | 申请日： | 2017-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN108333263A | 公开（公告）日： | 2018-07-27 |
| 发明（设计）人： | 秦钧;冷文川;倪晓天;路天元;甄蓓;王广舜;孙长青;钟博文 | 申请（专利权）人： | 北京蛋白质组研究中心 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司： | 北京骥驰知识产权代理有限公司 11422 | 代理人： | 唐晓峰 |
| 地址： | 102206 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种尿蛋白质组的检测方法，包括尿蛋白的制备、在蛋白或肽水平的分离、质谱鉴定，其特征在于，所述尿蛋白制备方法包括下面步骤(1)将尿液样品在常温下超速离心一段时间，弃去上清液，保留沉淀；(2)向步骤(1)所述的沉淀中加入适量的重悬缓冲液使沉淀重悬；(3)向步骤(2)所得的重悬液中加入能打开二硫键的还原剂，于37‑80℃温度下加热10‑60分钟；(4)向步骤(3)所得的溶液中添加清洗缓冲液，然后高速离心一段时间，弃去上清，保留沉淀；(5)用消化缓冲液重新溶解步骤(4)所得的沉淀，之后进行蛋白的溶液内酶解，或用一维电泳(SDS‑PAGE)进行蛋白分离。本发明方法简化了尿蛋白的制备过程、提高了检测的准确性和重复性，并且可用于高通量定量深度尿蛋白质组检测。 | ||
| 搜索关键词： | 沉淀 尿蛋白 尿蛋白质 制备 检测 重悬 蛋白 高通量定量 清洗缓冲液 消化缓冲液 超速离心 蛋白分离 高速离心 尿液样品 一维电泳 制备过程 质谱鉴定 常温下 二硫键 还原剂 缓冲液 上清液 重悬液 肽水平 保留 可用 酶解 加热 溶解 | ||
【主权项】：
1.一种尿蛋白制备方法，包括下面步骤：(1)将尿液样品在常温下超速离心一段时间，弃去上清液，保留沉淀；(2)向步骤(1)所述的沉淀中加入适量的重悬缓冲液使沉淀重悬；(3)向步骤(2)所得的重悬液中加入能打开二硫键的还原剂，于37‑80℃温度下加热10‑60分钟；(4)向步骤(3)所得的溶液中添加清洗缓冲液，然后高速离心一段时间，弃去上清，保留沉淀；(5)用消化缓冲液重新溶解步骤(4)所得的沉淀，之后进行蛋白的溶液内酶解，或用一维电泳(SDS‑PAGE)进行蛋白分离。
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